22．RBD是新型冠狀病毒表面囊膜S蛋白的受體結(jié)合域肽段。Fc為人源抗體IgGⅠ的部分重鏈，能通過二硫鍵相結(jié)合形成Fc二聚體?？蒲腥藛T為研制重組蛋白疫苗，構(gòu)建了融合表達RBD和Fc的重組質(zhì)粒。實驗流程圖1如下，請回答下列問題。
（1）通過重疊延伸PCR（重疊鏈相互搭橋、互為模板而延伸，最終將不同來源的DNA片段拼接起來）獲取融合基因。
①第一次PCR和第二次PCR的反應體系中不同的有
，第一次PCR中至少經(jīng)
次擴增，可得到末端平齊且含引物2的產(chǎn)物；
②有關基因序列如圖2，據(jù)圖分析，引物1和引物4應選擇下列選項的
。
A．5'CTTGTACAG-----3'
B．5'TGGTTGTGG-----3'
C．5'GCTCACCAT-----3'
D．5'CCACAACCA-----3'
③經(jīng)第三次PCR獲取融合基因，第三次PCR比第一次PCR延伸所需時間
（填“長”或“短”），原因是
。
（2）構(gòu)建基因表達載體
| 分步實驗目的 |
簡易操作 |
| 酶切融合基因和質(zhì)粒pCDNA3.1 |
37℃條件下，酶切8小時，電泳鑒定、回收；酶切位點應添加在引物1和4的① 端 |
| 獲取重組質(zhì)粒 |
將上述融合基因、質(zhì)粒和② 酶一起加入反應體系，16℃反應過夜 |
| 利用大腸桿菌③ |
將產(chǎn)物加入感受態(tài)大腸桿菌培養(yǎng)液，培養(yǎng)過夜，提取更多重組質(zhì)粒 |
（3）將目的基因?qū)肴伺咛ツI細胞將重組質(zhì)粒、聚乙烯亞胺溶液加入到狀態(tài)良好的人胚胎腎細胞培養(yǎng)液中，培養(yǎng)4～5天，分離純化融合表達蛋白，推測聚乙烯亞胺溶液的作用是
。
（4）已知RBD二聚體疫苗比RBD單體疫苗效果更優(yōu)，推斷重組蛋白中Fc的作用是
。
