雞干擾素是一種具有高效和廣譜抗病毒作用的細(xì)胞因子,廣泛用于動(dòng)物領(lǐng)域的抗病毒治療??蒲腥藛T將雞干擾素基因作為目的基因,構(gòu)建重組質(zhì)粒,導(dǎo)入煙草,以獲得抗病毒煙草?;卮饐?wèn)題:
(1)已知雞干擾素基因的核苷酸序列,則可采用
人工合成
人工合成
方法獲得目的基因,對(duì)其進(jìn)行克隆常采用
PCR
PCR
技術(shù)。
(2)重組質(zhì)粒中應(yīng)有RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的部位,該部位稱為
啟動(dòng)子
啟動(dòng)子
。
(3)由于細(xì)胞壁的存在,植物的組織培養(yǎng)和克隆有一定的難度,故常用
農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法
農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法
(方法)將重組質(zhì)粒導(dǎo)入煙草細(xì)胞的
原生質(zhì)體
原生質(zhì)體
,再進(jìn)行培養(yǎng)。待重新長(zhǎng)出細(xì)胞壁,形成胚性細(xì)胞,此時(shí),應(yīng)該
降低
降低
培養(yǎng)基中甘露醇的濃度,以利于胚性細(xì)胞繼續(xù)培養(yǎng)形成細(xì)胞團(tuán),然后經(jīng)兩條途徑形成轉(zhuǎn)基因煙草植株。該轉(zhuǎn)基因煙草植株在多次繼代培養(yǎng)后,會(huì)
保持
保持
(“保持”或“喪失”)細(xì)胞全能性的表達(dá)。
(4)若轉(zhuǎn)基因煙草植株對(duì)病毒的侵染表現(xiàn)出一定的抗性,但抗性較低,可能原因是
轉(zhuǎn)基因煙草體內(nèi)干擾素的合成量較低
轉(zhuǎn)基因煙草體內(nèi)干擾素的合成量較低
。