30.pBV220質(zhì)粒是被廣泛應(yīng)用的大腸桿菌載體,結(jié)構(gòu)如下圖所示。其中P
RP
L是啟動子,rrB是基因轉(zhuǎn)錄終止信號,Ampr是氨芐青霉素抗性基因,ori是質(zhì)粒復(fù)制起點,EcoRⅠ、HindⅢ、BamHⅠ、PstⅠ均為限制性內(nèi)切酶?;卮鹣铝袉栴}:
(1)從圖中可看出,pBV220作為運載體具備的條件有
。(至少答兩點)
(2)將目的基因與此質(zhì)粒構(gòu)建基因表達(dá)載體時,通常用圖中
兩種限制酶切割此質(zhì)粒,其優(yōu)點是
。用這兩種酶可以切開此質(zhì)粒的
個磷酸二酯鍵,并且會
(填“消耗”或“產(chǎn)生”)同樣數(shù)量的水分子。
(3)將構(gòu)建好的基因表達(dá)載體導(dǎo)入大腸桿菌前,需用
處理大腸桿菌,使之成為
細(xì)胞,以提高轉(zhuǎn)化效率。目的基因是否成功導(dǎo)入大腸桿菌,可采用
進行檢測。
(4)科研人員發(fā)現(xiàn)番茄的成熟、腐爛與乙烯基因表達(dá)有關(guān)。為了提高番茄的耐貯運性能,科研人員運用基因工程技術(shù)減緩乙烯的生成。采用
技術(shù)可得到大量的yx-1基因,這個基因的表達(dá)需要
等不可缺少的調(diào)控組件。