23.人絨毛膜促性腺激素(HCG)是一種糖蛋白激素,由α鏈和β鏈(hCGβ)結(jié)合而成。近年研究顯示,hCGβ可表達(dá)于結(jié)腸癌等多種惡性腫瘤細(xì)胞,研發(fā)抗hCGβ疫苗已成為近年來腫瘤生物治療新的熱點,如圖1為其主要研究路線,請回答下列問題。
(1)女性在妊娠第8d左右,盡管體內(nèi)HCG含量很低,但仍可用抗人絨毛膜促性腺激素單抗制成的“早早孕診斷試劑盒”作出診斷,體現(xiàn)出單克隆抗體具有
的優(yōu)點。某女性未受孕但被檢測出血清HCG含量大幅度升高,為明確原因,還需進(jìn)行
檢測。
(2)登錄GenBank數(shù)據(jù)庫,可查詢獲得hCGβ基因組序列,再通過
可特異性地快速擴(kuò)增hCGβ基因。用圖中質(zhì)粒和目的基因構(gòu)建重組質(zhì)粒,應(yīng)選用
兩種限制酶(選填編號①EcoRⅠ②NheⅠ③KpnⅠ④BamHⅠ)切割。
(3)酶切后的載體和目的基因片段,通過
酶作用后形成混合連接物,導(dǎo)入處于
狀態(tài)的大腸桿菌細(xì)胞。為了篩選出轉(zhuǎn)入重組質(zhì)粒的大腸桿菌,可用酶切法鑒定重組質(zhì)粒,通過電泳檢測酶切片段判斷是否構(gòu)建成功。選用與構(gòu)建重組質(zhì)粒相同的酶處理重組質(zhì)粒,電泳后得到如圖2所示結(jié)果,據(jù)圖2可判斷
號樣品為構(gòu)建成功的重組質(zhì)粒,4號樣品最可能為
。
(4)培養(yǎng)小鼠黑色素瘤細(xì)胞過程中,除無菌、無毒的環(huán)境外,還要控制適宜的
(至少答出兩點)和滲透壓等條件。從細(xì)胞結(jié)構(gòu)角度解釋,動物細(xì)胞培養(yǎng)需要考慮滲透壓的原因是
(5)HCG是胚胎著床和妊娠維持所必須的種激素,若對育齡女性腫瘤患者多次使用抗HCG疫苗,可能引發(fā)的副作用是
。