人絨毛膜促性腺激素（HCG）是一種糖蛋白激素，由α鏈和β鏈（hCGβ）結(jié)合而成。近年研究顯示，hCGβ可表達(dá)于結(jié)腸癌等多種惡性腫瘤細(xì)胞，研發(fā)抗hCGβ疫苗已成為近年來腫瘤生物治療新的熱點(diǎn)，如圖1為其主要研究路線，請(qǐng)回答下列問題。

（1）女性在妊娠第8d左右，盡管體內(nèi)HCG含量很低，但仍可用抗人絨毛膜促性腺激素單抗制成的“早早孕診斷試劑盒”作出診斷，體現(xiàn)出單克隆抗體具有

特異性強(qiáng)、靈敏度高

特異性強(qiáng)、靈敏度高

的優(yōu)點(diǎn)。某女性未受孕但被檢測(cè)出血清HCG含量大幅度升高，為明確原因，還需進(jìn)行

腫瘤

腫瘤

檢測(cè)。
（2）登錄GenBank數(shù)據(jù)庫，可查詢獲得hCGβ基因組序列，再通過

PCR

PCR

可特異性地快速擴(kuò)增hCGβ基因。用圖中質(zhì)粒和目的基因構(gòu)建重組質(zhì)粒，應(yīng)選用

②③

②③

兩種限制酶（選填編號(hào)①EcoRⅠ②NheⅠ③KpnⅠ④BamHⅠ）切割。
（3）酶切后的載體和目的基因片段，通過

DNA連接

DNA連接

酶作用后形成混合連接物，導(dǎo)入處于

感受態(tài)

感受態(tài)

狀態(tài)的大腸桿菌細(xì)胞。為了篩選出轉(zhuǎn)入重組質(zhì)粒的大腸桿菌，可用酶切法鑒定重組質(zhì)粒，通過電泳檢測(cè)酶切片段判斷是否構(gòu)建成功。選用與構(gòu)建重組質(zhì)粒相同的酶處理重組質(zhì)粒，電泳后得到如圖2所示結(jié)果，據(jù)圖2可判斷

3

3

號(hào)樣品為構(gòu)建成功的重組質(zhì)粒，4號(hào)樣品最可能為

普通質(zhì)粒

普通質(zhì)粒

。
（4）培養(yǎng)小鼠黑色素瘤細(xì)胞過程中，除無菌、無毒的環(huán)境外，還要控制適宜的

溫度、pH、溶解氧

溫度、pH、溶解氧

（至少答出兩點(diǎn)）和滲透壓等條件。從細(xì)胞結(jié)構(gòu)角度解釋，動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)需要考慮滲透壓的原因是

動(dòng)物細(xì)胞沒有細(xì)胞壁，對(duì)培養(yǎng)液的滲透壓比較敏感

動(dòng)物細(xì)胞沒有細(xì)胞壁，對(duì)培養(yǎng)液的滲透壓比較敏感

（5）HCG是胚胎著床和妊娠維持所必須的種激素，若對(duì)育齡女性腫瘤患者多次使用抗HCG疫苗，可能引發(fā)的副作用是

不易受孕

不易受孕

。