12.CRISPR/Cas9基因編輯技術(shù)可以按照人們的意愿精準(zhǔn)剪切、改變?nèi)我獍谢虻倪z傳信息,對(duì)該研究有突出貢獻(xiàn)的科學(xué)家被授予2020年諾貝爾化學(xué)獎(jiǎng)。科學(xué)家正設(shè)想利用基因編輯技術(shù)將豬基因組中“敲入”某種調(diào)節(jié)因子,抑制抗原決定基因的表達(dá),培育出沒(méi)有免疫排斥反應(yīng)的豬器官,解決人類(lèi)移植器官短缺的難題。請(qǐng)回答下列問(wèn)題:
(1)欲獲得大量的調(diào)節(jié)因子,可以利用PCR技術(shù)進(jìn)行擴(kuò)增。在PCR反應(yīng)體系中需要加入一定的Taq酶和足量的引物(循環(huán)次數(shù)越多,引物加入量越大)等,引物需要足量的原因是
。
(2)CRISPR/Cas9基因編輯技術(shù)中,SgRNA是根據(jù)靶基因設(shè)計(jì)的引導(dǎo)RNA,準(zhǔn)確引導(dǎo)Cas9切割與SgRNA配對(duì)的靶基因DNA序列,由此可見(jiàn),Cas9在功能上屬于
酶,切割的是DNA中的
鍵。
(3)在相關(guān)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中,為了確認(rèn)豬細(xì)胞中抗原決定基因是否表達(dá)出蛋白質(zhì),常用的檢測(cè)方法是
。若檢測(cè)結(jié)果為
,則表明調(diào)節(jié)因子已經(jīng)發(fā)揮作用。
(4)將含有調(diào)節(jié)因子的豬細(xì)胞在體外培養(yǎng)時(shí),會(huì)出現(xiàn)細(xì)胞貼壁現(xiàn)象。為了使細(xì)胞更好地貼壁生長(zhǎng),要求培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)表面
。
(5)為了獲得沒(méi)有免疫排斥反應(yīng)的轉(zhuǎn)基因豬,需要將調(diào)節(jié)因子已經(jīng)發(fā)揮作用的豬細(xì)胞的細(xì)胞核移入
中,用物理或化學(xué)方法激活受體細(xì)胞,使其完成
,再進(jìn)行胚胎移植獲得轉(zhuǎn)基因克隆豬。