CRISPR/Cas9基因編輯技術(shù)可以按照人們的意愿精準剪切、改變?nèi)我獍谢虻倪z傳信息,對該研究有突出貢獻的科學家被授予2020年諾貝爾化學獎。科學家正設(shè)想利用基因編輯技術(shù)將豬基因組中“敲入”某種調(diào)節(jié)因子,抑制抗原決定基因的表達,培育出沒有免疫排斥反應(yīng)的豬器官,解決人類移植器官短缺的難題。請回答下列問題:
(1)欲獲得大量的調(diào)節(jié)因子,可以利用PCR技術(shù)進行擴增。在PCR反應(yīng)體系中需要加入一定的Taq酶和足量的引物(循環(huán)次數(shù)越多,引物加入量越大)等,引物需要足量的原因是
每一條子鏈的形成都需要一個引物,這個引物就成為子鏈的一部分,不能再重復利用
每一條子鏈的形成都需要一個引物,這個引物就成為子鏈的一部分,不能再重復利用
。
(2)CRISPR/Cas9基因編輯技術(shù)中,SgRNA是根據(jù)靶基因設(shè)計的引導RNA,準確引導Cas9切割與SgRNA配對的靶基因DNA序列,由此可見,Cas9在功能上屬于
限制性核酸內(nèi)切
限制性核酸內(nèi)切
酶,切割的是DNA中的
磷酸二酯
磷酸二酯
鍵。
(3)在相關(guān)實驗過程中,為了確認豬細胞中抗原決定基因是否表達出蛋白質(zhì),常用的檢測方法是
抗原-抗體雜交
抗原-抗體雜交
。若檢測結(jié)果為
沒有出現(xiàn)雜交帶
沒有出現(xiàn)雜交帶
,則表明調(diào)節(jié)因子已經(jīng)發(fā)揮作用。
(4)將含有調(diào)節(jié)因子的豬細胞在體外培養(yǎng)時,會出現(xiàn)細胞貼壁現(xiàn)象。為了使細胞更好地貼壁生長,要求培養(yǎng)瓶內(nèi)表面
光滑、無毒,易于貼附
光滑、無毒,易于貼附
。
(5)為了獲得沒有免疫排斥反應(yīng)的轉(zhuǎn)基因豬,需要將調(diào)節(jié)因子已經(jīng)發(fā)揮作用的豬細胞的細胞核移入
去核卵母細胞
去核卵母細胞
中,用物理或化學方法激活受體細胞,使其完成
細胞分裂和發(fā)育進程(分裂和分化)
細胞分裂和發(fā)育進程(分裂和分化)
,再進行胚胎移植獲得轉(zhuǎn)基因克隆豬。