21.VNN1基因(1542bp)與炎癥相關(guān)性疾病有關(guān),GFP基因(4735bp)控制綠色熒光蛋白的合成,該蛋白可在相應(yīng)波長的紫外光激發(fā)下發(fā)出綠色熒光。某研究小組進(jìn)行鼠源GFP-VNN1重組質(zhì)粒的構(gòu)建及其功能研究,回答下列問題:
(1)為構(gòu)建重組質(zhì)粒,研究小組從數(shù)據(jù)庫查找到VNNl的DNA序列,并設(shè)計(jì)引物。上游引物:5'-
AAGCTTCCGCTGCACCATGACTACTC-3'(下劃線為HindⅢ酶切位點(diǎn)),下游引物:5'-
GGATCCGCTCGAGCTACCAACTTAATGA-3'(下劃線為BamH I酶切位點(diǎn)),之后進(jìn)行PCR擴(kuò)增,PCR的原理是
。擴(kuò)增后的VNN1基因要與含GFP基因的載體連接,需用
(填具體酶)切割VNN1基因和含GFP基因的載體,再用
酶處理,構(gòu)建重組質(zhì)粒。
(2)GFP基因在重組質(zhì)粒中可作為
,其作用是
。用之前相同的限制酶對GFP-VNN1重組質(zhì)粒切割后,進(jìn)行電泳鑒定時(shí)得到如圖1所示的部分條帶,結(jié)果表明
。
(3)IL-6為體內(nèi)重要的炎癥因子,能與相應(yīng)的受體結(jié)合,激活炎癥反應(yīng)。圖2為GFP-VNN1重組質(zhì)粒對細(xì)胞分泌IL-6的影響,由此說明
,同時(shí)發(fā)現(xiàn)與正常組比較,空質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組IL-6的表達(dá)有輕微升高,造成這種現(xiàn)象的可能原因是
。