VNN1基因(1542bp)與炎癥相關性疾病有關,GFP基因(4735bp)控制綠色熒光蛋白的合成,該蛋白可在相應波長的紫外光激發(fā)下發(fā)出綠色熒光。某研究小組進行鼠源GFP-VNN1重組質粒的構建及其功能研究,回答下列問題:
(1)為構建重組質粒,研究小組從數據庫查找到VNNl的DNA序列,并設計引物。上游引物:5'-
AAGCTTCCGCTGCACCATGACTACTC-3'(下劃線為HindⅢ酶切位點),下游引物:5'-
GGATCCGCTCGAGCTACCAACTTAATGA-3'(下劃線為BamH I酶切位點),之后進行PCR擴增,PCR的原理是
DNA雙鏈復制
DNA雙鏈復制
。擴增后的VNN1基因要與含GFP基因的載體連接,需用
HindⅢ酶和BamHⅠ酶
HindⅢ酶和BamHⅠ酶
(填具體酶)切割VNN1基因和含GFP基因的載體,再用
DNA連接酶
DNA連接酶
酶處理,構建重組質粒。
(2)GFP基因在重組質粒中可作為
標記基因
標記基因
,其作用是
鑒別受體細胞中是否含有目的基因,從而將含目的基因的細胞篩選出來
鑒別受體細胞中是否含有目的基因,從而將含目的基因的細胞篩選出來
。用之前相同的限制酶對GFP-VNN1重組質粒切割后,進行電泳鑒定時得到如圖1所示的部分條帶,結果表明
VNN1基因已經插入到含GFP基因的載體中
VNN1基因已經插入到含GFP基因的載體中
。
(3)IL-6為體內重要的炎癥因子,能與相應的受體結合,激活炎癥反應。圖2為GFP-VNN1重組質粒對細胞分泌IL-6的影響,由此說明
VNN1基因表達產物能促進細胞分泌炎癥因子IL-6
VNN1基因表達產物能促進細胞分泌炎癥因子IL-6
,同時發(fā)現(xiàn)與正常組比較,空質粒轉染組IL-6的表達有輕微升高,造成這種現(xiàn)象的可能原因是
操作過程中對細胞的損傷(或用到化學試劑對細胞具有一定的毒性作用),可以激活相應細胞分泌炎癥因子IL-6
操作過程中對細胞的損傷(或用到化學試劑對細胞具有一定的毒性作用),可以激活相應細胞分泌炎癥因子IL-6
。