16.鋁在土壤中常以鋁酸鹽的形式存在,可造成土壤酸化而影響植物生長。鋁能抑制植物根尖細(xì)胞的分裂,破壞根組織。某植物甲的根毛細(xì)胞的細(xì)胞膜上存在蘋果酸通道蛋白(ALMT),該通道蛋白能將蘋果酸轉(zhuǎn)運(yùn)到細(xì)胞外來緩解鋁毒??蓪⒖刂艫LMT的基因?qū)氩荒弯X的植物中,最終獲得耐鋁植物。請(qǐng)回答下列問題:
(1)如表是運(yùn)載體上出現(xiàn)的幾種限制酶的識(shí)別序列及切割位點(diǎn)。用表中的限制酶切割 DNA后能形成相同黏性末端的是
。(識(shí)別序列中的1表示酶切位點(diǎn))
限制酶 |
識(shí)別序列和切割位點(diǎn) |
EcoRⅠ |
G↓AATTC |
BamHⅠ |
G↓GATCC |
HindⅢ |
A↓AGCTT |
XhoⅠ |
C↓TCGAG |
NdeⅠ |
CA↓TATG |
SalⅠ |
G↓TCGAC |
(2)欲獲得ALMT基因的cDNA,科研人員從
細(xì)胞中獲取總mRNA,在相應(yīng)酶作用下獲得多種cDNA,再利用ALMT基因制作出特異性
,通過PCR方法得到ALMT基因的cDNA。
(3)啟動(dòng)子是
識(shí)別并結(jié)合的位點(diǎn),能調(diào)控目的基因的表達(dá)。ALMT基因的啟動(dòng)子有兩種類型,其中α啟動(dòng)子能使ALMT基因在酸性土壤的誘導(dǎo)下表達(dá),β啟動(dòng)子能使ALMT基因高效表達(dá)而無需酸性誘導(dǎo)。在獲得轉(zhuǎn)ALMT基因耐鋁植物時(shí)應(yīng)使用
啟動(dòng)子,不使用另外一種啟動(dòng)子的原因是
,導(dǎo)致正常土壤酸化,并影響植物生長。
(4)科研人員采用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法,首先將ALM基因?qū)胫参锛?xì)胞并整合到受體細(xì)胞染色體的DNA上,再通過
技術(shù)成功獲得了耐鋁植株。
(5)若將一株耐鋁植株與普通植株雜交,得到的后代中耐鋁植株:普通植株約為3:1,則可判斷這株耐鋁植株細(xì)胞至少轉(zhuǎn)入了
個(gè)ALMT基因,轉(zhuǎn)入的基因在染色體上的位置關(guān)系是:
;若使這株耐鋁植株自交,后代中耐鋁植株:普通植株約為
。