17．四環(huán)素被廣泛應用于治療人及動物的細菌感染，但殘留在動物組織、奶制品中的四環(huán)素通過食物鏈進入人體，會對人類健康造成威脅。為保障食品安全和人類健康，科研人員向大腸桿菌體內導入了一些特殊的DNA序列作為生物傳感器，從而建立一種簡易、靈敏以及準確的四環(huán)素檢測方法。
（1）研究者利用圖1所示的原理設計四環(huán)素檢測傳感器。
當環(huán)境中沒有四環(huán)素時，GFP（綠色熒光蛋白）基因
。當環(huán)境中有四環(huán)素時，四環(huán)素能夠解除
，最終使菌體
。因此可以通過檢測熒光強弱來判定環(huán)境中的四環(huán)素濃度。
（2）研究者利用基因工程技術構建含四環(huán)素檢測傳感器的大腸桿菌工程菌。
①利用圖2所示的質粒1和質粒2，構建同時含片段1和片段2的表達載體，可用限制酶
和
分別處理質粒1和質粒2，再用DNA連接酶連接。（四種限制酶的識別序列及切割位點如表所示）
| 限制酶 |
E |
X |
S |
P |
| 識別序列及切割位點 |
5′…G↓AATTC…3′
3′…CTTAA↑G…5′ |
5′…T↓CTAGA…3′
3′…AGATC↑T…5′ |
5′…A↓CTAGT…3′
3′…TGATC↑A…5′ |
5′…CTGCA↓G…3′
3′…G↑ACGTC…5′ |
②研究者通過上述方法將所有的啟動子和相應基因的DNA片段與載體連接，構建表達載體，導入用
處理的大腸桿菌細胞內。經過篩選，獲得工程菌。
（3）研究者發(fā)現(xiàn)在四環(huán)素濃度較低時，隨四環(huán)素濃度增加，工程菌的熒光強度變化不明顯。欲獲得檢測靈敏度更高的傳感器，從以下選項中選擇啟動子和基因，構建表達載體并轉入大腸桿菌后篩選。請從方案一、二中選擇最合適的一種方案，將所選序號填入橫線上
。
Ⅰ.啟動子：
①啟動子A
②啟動子B
③經T7RNA聚合酶特異性誘導開啟的啟動子
Ⅱ.基因：
A：R基因
B：GFP基因
C：T7基因（表達T7RNA聚合酶，其活性比大腸桿菌RNA聚合酶更高）
D：sfGFP基因（表達熒光強度和穩(wěn)定性都高于GFP的綠色熒光蛋白）
