25.孔雀石綠(簡稱MG)是廣泛使用的有機(jī)染料,在自然環(huán)境中極難降解,容易引起土壤污染,進(jìn)而危害人體健康。因此從土壤中分離和篩選出高效的MG降解菌有非常重要的意義。已知MG在水中溶解度低,含過量MG的固體培養(yǎng)基不透明。
(1)培養(yǎng)基的配制:MG降解菌富集培養(yǎng)基需含有NaH
2PO
4、KH
2PO
4、NaCl、NH
4Cl、CaCl
2、MgSO
4、水等,再加
作為唯一碳源。配制好的培養(yǎng)基,需用
法進(jìn)行滅菌。
(2)MG高效降解菌株的分離和純化:圖中所示的分離純化細(xì)菌的方法是
,用該方法統(tǒng)計(jì)樣品的菌落數(shù)目比活菌的實(shí)際數(shù)目
(“少”或“多”),原因是
。實(shí)驗(yàn)室采用此方法,將1mL樣品稀釋1000倍,在3個(gè)平板上分別接入0.1mL稀釋液;經(jīng)正確操作培養(yǎng)后,3個(gè)平板上的菌落數(shù)分別為150、158和160.據(jù)此可得出每升樣品中的活菌數(shù)至少為
個(gè)。
(3)黑曲霉是一種絲狀真菌,黑曲霉的PDA液體產(chǎn)酶培養(yǎng)基組成為:麩皮、豆粉餅、(NH
4)
2SO
4、MgSO
4?7H
2O、KH
2PO
4,培養(yǎng)時(shí)需要通氣振蕩。豆粉餅可提供黑曲霉生長所需的
;若要分離黑曲霉菌落,上述培養(yǎng)基中還需要添加
,在培養(yǎng)基滅菌前需將pH調(diào)至
(填“酸性”“中性”或“堿性”)。
(4)計(jì)數(shù)黑曲霉菌液孢子濃度的方法為:用多層紗布過濾黑曲霉培養(yǎng)液得到孢子懸浮液,取1mL懸浮液用無菌水逐級(jí)稀釋10
4倍,再取稀釋液滴加至血細(xì)胞計(jì)數(shù)板(規(guī)格為1mm×1mm×0.1mm,由400個(gè)小格組成)進(jìn)行計(jì)數(shù),統(tǒng)計(jì)得到計(jì)數(shù)的小格中平均孢子數(shù)2個(gè),則黑曲霉培養(yǎng)液中孢子濃度為為
個(gè)mL
-1。
(5)以大豆為主要原料,利用黑曲霉產(chǎn)生的蛋白酶可將原料中的蛋白質(zhì)水解成
,然后經(jīng)淋洗、調(diào)制可得到醬油。