24.近年來(lái),過(guò)度依賴(lài)提高養(yǎng)殖密度和過(guò)量投餌的養(yǎng)殖方式,導(dǎo)致出現(xiàn)養(yǎng)殖環(huán)境生態(tài)失調(diào)、病害頻發(fā)、水資源浪費(fèi)和污染嚴(yán)重等現(xiàn)象。益生菌能夠改善水質(zhì),抑制有害菌的生長(zhǎng),保持微生態(tài)平衡,是水產(chǎn)動(dòng)物防控病害的有效手段之一。研究人員從鯽魚(yú)腸道樣品中分離出具有抑菌效果的菌株,為開(kāi)發(fā)適用于水產(chǎn)養(yǎng)殖的抑菌類(lèi)微生態(tài)制劑提供參考。抑菌效果用指示菌(嗜水氣單胞菌、哈維氏弧菌、溶藻弧菌、副溶血弧菌等有害菌)進(jìn)行檢驗(yàn)。用到LB液體培養(yǎng)基:蛋白胨1%、酵母膏0.5%、氯化鈉0.5%、水100mL。請(qǐng)回答下列問(wèn)題:
(1)LB液體培養(yǎng)基中的蛋白胨能為微生物提供
;用高壓蒸汽滅菌鍋對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌時(shí),水沸騰后,待
,再關(guān)閉排氣閥。
(2)將樣品鯽魚(yú)腸道內(nèi)容物制成稀釋液,接種至LB液體培養(yǎng)基進(jìn)行富集培養(yǎng),目的是
;將富集培養(yǎng)液加至LB固體培養(yǎng)基平板,涂布均勻,37℃恒溫培養(yǎng)。配制LB固體培養(yǎng)基時(shí),通常需向LB液體培養(yǎng)基中加入
;菌落長(zhǎng)出后,常采用
法將其轉(zhuǎn)接種到新的平板上進(jìn)一步純化,得到初篩菌株。
(3)采用打孔法測(cè)定初篩菌株的抑菌效果:吸取稀釋好的
菌液0.6mL加入平板;使用2.7mm的直徑打孔器,在平板上垂直均勻打孔,標(biāo)記菌株編號(hào),每孔分別注入10μL
菌液,培養(yǎng)24h。每個(gè)樣品做3個(gè)平板。培養(yǎng)完畢,檢測(cè)板上出現(xiàn)抑菌圈,測(cè)量
,取平均值。
(4)經(jīng)鑒定,菌株YJ4的抑菌效果最好,為進(jìn)一步驗(yàn)證菌株YJ4的安全性,選擇健康鯽魚(yú)80尾,隨機(jī)均分為4組。實(shí)驗(yàn)組分別采用腹腔注射法注射0.1mL濃度分別為1×10
9、1×10
8和1×10
7單位/mL的YJ4菌懸液,適宜條件下飼養(yǎng)7d,觀察并記錄實(shí)驗(yàn)魚(yú)游動(dòng)、攝食及死亡情況,最后剖檢,觀察有無(wú)病變,對(duì)照組的處理為
。