近年來，過度依賴提高養(yǎng)殖密度和過量投餌的養(yǎng)殖方式，導致出現(xiàn)養(yǎng)殖環(huán)境生態(tài)失調(diào)、病害頻發(fā)、水資源浪費和污染嚴重等現(xiàn)象。益生菌能夠改善水質(zhì)，抑制有害菌的生長，保持微生態(tài)平衡，是水產(chǎn)動物防控病害的有效手段之一。研究人員從鯽魚腸道樣品中分離出具有抑菌效果的菌株，為開發(fā)適用于水產(chǎn)養(yǎng)殖的抑菌類微生態(tài)制劑提供參考。抑菌效果用指示菌（嗜水氣單胞菌、哈維氏弧菌、溶藻弧菌、副溶血弧菌等有害菌）進行檢驗。用到LB液體培養(yǎng)基：蛋白胨1%、酵母膏0.5%、氯化鈉0.5%、水100mL。請回答下列問題：
（1）LB液體培養(yǎng)基中的蛋白胨能為微生物提供
碳源、氮源（和維生素）
碳源、氮源（和維生素）
；用高壓蒸汽滅菌鍋對培養(yǎng)基進行滅菌時，水沸騰后，待
冷空氣徹底排除后
冷空氣徹底排除后
，再關(guān)閉排氣閥。
（2）將樣品鯽魚腸道內(nèi)容物制成稀釋液，接種至LB液體培養(yǎng)基進行富集培養(yǎng)，目的是
增加目的菌的數(shù)量
增加目的菌的數(shù)量
；將富集培養(yǎng)液加至LB固體培養(yǎng)基平板，涂布均勻，37℃恒溫培養(yǎng)。配制LB固體培養(yǎng)基時，通常需向LB液體培養(yǎng)基中加入
瓊脂（凝固劑）
瓊脂（凝固劑）
；菌落長出后，常采用
平板劃線
平板劃線
法將其轉(zhuǎn)接種到新的平板上進一步純化，得到初篩菌株。
（3）采用打孔法測定初篩菌株的抑菌效果：吸取稀釋好的
指示
指示
菌液0.6mL加入平板；使用2.7mm的直徑打孔器，在平板上垂直均勻打孔，標記菌株編號，每孔分別注入10μL
初篩菌株
初篩菌株
菌液，培養(yǎng)24h。每個樣品做3個平板。培養(yǎng)完畢，檢測板上出現(xiàn)抑菌圈，測量
抑菌圈的直徑（大小）
抑菌圈的直徑（大?。?/div>，取平均值。
（4）經(jīng)鑒定，菌株YJ4的抑菌效果最好，為進一步驗證菌株YJ4的安全性，選擇健康鯽魚80尾，隨機均分為4組。實驗組分別采用腹腔注射法注射0.1mL濃度分別為1×10
9、1×10
8和1×10
7單位/mL的YJ4菌懸液，適宜條件下飼養(yǎng)7d,觀察并記錄實驗魚游動、攝食及死亡情況，最后剖檢，觀察有無病變，對照組的處理為
采用腹腔注射法注射0.1mL生理鹽水
采用腹腔注射法注射0.1mL生理鹽水
。
【答案】碳源、氮源（和維生素）；冷空氣徹底排除后；增加目的菌的數(shù)量；瓊脂（凝固劑）；平板劃線；指示；初篩菌株；抑菌圈的直徑（大?。?；采用腹腔注射法注射0.1mL生理鹽水
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/4/20 14:35:0組卷：7引用：2難度：0.7
