21.下面是將乙肝病毒控制合成的病毒表面主蛋白的基因HBsAg導(dǎo)入巴斯德畢赤酵母菌生產(chǎn)乙肝疫苗的過程及有關(guān)資料,請分析回答下列問題。
資料1:巴斯德畢赤酵母菌可用培養(yǎng)基中甲醇作為其生活的唯一碳源,同時AOX1基因(醇氧化酶基因)受到誘導(dǎo)而表達(dá),5′AOX1和3′AOX1(TT)是基因AOX1的啟動子和終止子,此啟動子也能使外源基因高效表達(dá)。
資料2:巴斯德畢赤酵母菌體內(nèi)無天然質(zhì)粒,下圖為科學(xué)家改造的pPIC9K質(zhì)粒,其與目的基因形成的重組質(zhì)粒在特定部位酶切后形成的重組DNA片段可以整合到酵母菌染色體上,最終實現(xiàn)目的基因的表達(dá)。
(1)基因表達(dá)載體的構(gòu)建是基因工程的核心,一個完整的基因表達(dá)載體至少包括哪些部分?
。
(2)如果要將HBsAg基因和pPIC9K質(zhì)粒重組,應(yīng)該在HBsAg基因兩側(cè)的A和B位置接上
限制酶識別序列,(SnaBⅠ、AvrⅡ、SacⅠ、BglⅡ四種限制酶的識別序列均不相同),這樣設(shè)計的優(yōu)點是避免質(zhì)粒和目的基因自身環(huán)化。
(3)酶切獲取HBsAg基因后,需用
將其連接到pPIC9K質(zhì)粒上,形成重組質(zhì)粒,根據(jù)步驟2可知步驟1將重組質(zhì)粒先導(dǎo)入大腸桿菌的目的是
。
(4)步驟3中應(yīng)選用限制酶
來切割從大腸桿菌分離的重組質(zhì)粒從而獲得圖中所示的重組DNA片段,然后將其導(dǎo)入巴斯德畢赤酵母菌細(xì)胞。
(5)為了確認(rèn)巴斯德畢赤酵母菌轉(zhuǎn)化是否成功,在培養(yǎng)基中應(yīng)該加入
以便篩選。
(6)轉(zhuǎn)化的酵母菌在培養(yǎng)基上培養(yǎng)一段時間后,需要向其中加入
以維持其生活,同時誘導(dǎo)HBsAg基因表達(dá)。
(7)培育轉(zhuǎn)化酵母細(xì)胞所利用的遺傳學(xué)原理是
。