21．四環(huán)素被廣泛應(yīng)用于治療人及動(dòng)物的細(xì)菌感染，但殘留在動(dòng)物組織、奶制品中的四環(huán)素通過(guò)食物鏈進(jìn)入人體，會(huì)對(duì)人類健康造成威脅。為保障食品安全和人類健康，科研人員向大腸桿菌體內(nèi)導(dǎo)入了一些特殊的DNA序列作為生物傳感器，從而建立一種簡(jiǎn)易、靈敏以及準(zhǔn)確的四環(huán)素檢測(cè)方法。
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（1）研究者利用如圖1所示的原理設(shè)計(jì)四環(huán)素檢測(cè)傳感器（圖中GFP為綠色熒光蛋白基因）。當(dāng)環(huán)境中有四環(huán)素時(shí)，菌體
（填“能”或者“不能”）發(fā)出綠色熒光，原因是
。因此可以通過(guò)檢測(cè)熒光強(qiáng)弱來(lái)判定環(huán)境中的四環(huán)素濃度。
（2）研究者利用基因工程技術(shù)構(gòu)建含四環(huán)素檢測(cè)傳感器的大腸桿菌工程菌。
①利用如圖2所示的質(zhì)粒1和質(zhì)粒2，構(gòu)建同時(shí)含片段1和片段2的表達(dá)載體，可用限制酶E、X和
分別處理質(zhì)粒1和質(zhì)粒2，再用DNA連接酶連接。（四種限制酶的識(shí)別序列及切割位點(diǎn)如下表所示）
| 限制酶 |
E |
X |
S |
P |
| 識(shí)別序列及切割位點(diǎn) |
5′…G↓AATTC…3′
3′…CTTAA↑G…5′ |
5′…T↓CTAGA…3′
3′…AGATC↑T…5′ |
5′…A↓CTAGT…3′
3′…TGATC↑A…5′ |
5′…CTGCA↓G…3′
3′…G↑ACGTC…5′ |
②研究者通過(guò)上述方法將所有的啟動(dòng)子和相應(yīng)基因的DNA片段與載體連接，構(gòu)建表達(dá)載體，導(dǎo)入用
處理的大腸桿菌細(xì)胞內(nèi)。經(jīng)過(guò)篩選，獲得工程菌。
（3）研究者發(fā)現(xiàn)在四環(huán)素濃度較低時(shí)，隨四環(huán)素濃度增加，工程菌的熒光強(qiáng)度變化不明顯。欲獲得檢測(cè)靈敏度更高的傳感器，參照（1）中的原理圖，從以下選項(xiàng)中選擇啟動(dòng)子和基因，構(gòu)建表達(dá)載體并轉(zhuǎn)入大腸桿菌后篩選，則啟動(dòng)子和基因最合適的組合應(yīng)為①A②
③
，該組合檢測(cè)靈敏度更高的原因是
。
Ⅰ.啟動(dòng)子：
①啟動(dòng)子A
②啟動(dòng)子B
③經(jīng)T7RNA聚合酶特異性誘導(dǎo)開啟的啟動(dòng)子
Ⅱ.基因：
A.R基因
B.GFP基因
C.T7基因（表達(dá)T7RNA聚合酶，其活性比大腸桿菌RNA聚合酶更高）
D.sfGFP基因（表達(dá)熒光強(qiáng)度和穩(wěn)定性都高于GFP的綠色熒光蛋白）
