30.研究表明EPA(二十碳五烯酸)能促進(jìn)體內(nèi)飽和脂肪酸代謝,具有降低血液黏稠度、預(yù)防心腦血管疾病的功效。研究人員利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)從海洋生物中提取了EPA合成途徑的關(guān)鍵基因pfaB,并采用合理且表達(dá)效率最高的方案構(gòu)建基因表達(dá)載體,將其導(dǎo)入酵母菌內(nèi),通過酵母菌發(fā)酵生產(chǎn)EPA。圖1表示目的基因(pfaB 基因)及其上的限制酶酶切位點(diǎn),圖2表示質(zhì)粒的結(jié)構(gòu)示意圖。請(qǐng)回答下列問題:
EcoRⅠ |
HindⅢ |
BamHⅠ |
SmaⅠ |
5′-G↓AATTC-3′ 3′-CTTAA↑G-5′ |
5′-A↓AGCTT-3′ 3′-TTCGA↑A-5′ |
5′-G↓GATCC-3′ 3′-CCTAG↑G-5′ |
5′-CCC↓GGG-3′ 3′-CCC↑GGG-5′ |
(1)根據(jù)圖1分析,利用PCR擴(kuò)增pfaB基因時(shí)所選用的引物是
,理由是
。
(2)根據(jù)圖1和圖2分析,構(gòu)建表達(dá)效率最高的基因表達(dá)載體時(shí),應(yīng)選擇
酶分別切割含目的基因的DNA和質(zhì)粒,目的是
。
(3)目的基因的檢測(cè)時(shí),采用PCR等技術(shù)可檢測(cè)
。(答出2點(diǎn))