研究表明EPA(二十碳五烯酸)能促進體內(nèi)飽和脂肪酸代謝,具有降低血液黏稠度、預防心腦血管疾病的功效。研究人員利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)從海洋生物中提取了EPA合成途徑的關(guān)鍵基因pfaB,并采用合理且表達效率最高的方案構(gòu)建基因表達載體,將其導入酵母菌內(nèi),通過酵母菌發(fā)酵生產(chǎn)EPA。圖1表示目的基因(pfaB 基因)及其上的限制酶酶切位點,圖2表示質(zhì)粒的結(jié)構(gòu)示意圖。請回答下列問題:
EcoRⅠ |
HindⅢ |
BamHⅠ |
SmaⅠ |
5′-G↓AATTC-3′ 3′-CTTAA↑G-5′ |
5′-A↓AGCTT-3′ 3′-TTCGA↑A-5′ |
5′-G↓GATCC-3′ 3′-CCTAG↑G-5′ |
5′-CCC↓GGG-3′ 3′-CCC↑GGG-5′ |
(1)根據(jù)圖1分析,利用PCR擴增pfaB基因時所選用的引物是
引物4和引物5
引物4和引物5
,理由是
利用pcr擴增目的基因時,子鏈的延伸方向是5’端向3’端,擴增產(chǎn)物應該包含酶切位點序列
利用pcr擴增目的基因時,子鏈的延伸方向是5’端向3’端,擴增產(chǎn)物應該包含酶切位點序列
。
(2)根據(jù)圖1和圖2分析,構(gòu)建表達效率最高的基因表達載體時,應選擇
BamHⅠ和HindⅢ
BamHⅠ和HindⅢ
酶分別切割含目的基因的DNA和質(zhì)粒,目的是
避免目的基因和質(zhì)粒自身環(huán)化,防止目的基因與質(zhì)粒反向連接
避免目的基因和質(zhì)粒自身環(huán)化,防止目的基因與質(zhì)粒反向連接
。
(3)目的基因的檢測時,采用PCR等技術(shù)可檢測
pfaB基因是否插入酵母菌染色體中及是否表達
pfaB基因是否插入酵母菌染色體中及是否表達
。(答出2點)