21．T-2毒素是一種常見(jiàn)的霉菌毒素，可通過(guò)污染飼料引起畜禽中毒反應(yīng)。CYP3A是豬體內(nèi)降解T-2毒素的關(guān)鍵酶，T-2毒素可誘導(dǎo)其表達(dá)水平升高。
（1）T-2毒素是一種脂溶性小分子，以
方式進(jìn)入細(xì)胞。
（2）CCAAT box和GC box是CYP3A基因啟動(dòng)子上游的兩個(gè)調(diào)控序列，研究者將不同調(diào)控序列分別和CYP3A基因啟動(dòng)子及熒光素酶基因（LUC基因）連接構(gòu)建表達(dá)載體，導(dǎo)入豬肝細(xì)胞，實(shí)驗(yàn)組培養(yǎng)基中加入T-2毒素，對(duì)照組的處理是
。24h后檢測(cè)LUC酶活性，計(jì)算啟動(dòng)子活性相對(duì)值，結(jié)果如圖1。據(jù)圖1可知，這兩個(gè)調(diào)控序列是CYP3A基因響應(yīng)T-2毒素的核心元件，理由是
。
（3）NF-Y和Sp1兩種蛋白均參與T-2毒素對(duì)CYP3A的誘導(dǎo)。已有研究表明，GC box是Sp1的結(jié)合位點(diǎn)。研究者推測(cè)，NF-Y通過(guò)與CCAAT box結(jié)合，與Sp1共同調(diào)控CYP3A基因的表達(dá)。
①依據(jù)CCAAT box序列，研究者制備N(xiāo)F-Y結(jié)合位點(diǎn)野生型及突變型探針，分別與豬肝細(xì)胞核蛋白提取物混合，結(jié)果如圖2。結(jié)果證明CCAAT box是NF-Y的結(jié)合位點(diǎn)。請(qǐng)解釋第4、5組實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象出現(xiàn)的原因
。
②抑制豬肝細(xì)胞中NF-Y或Sp1的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)CYP3A的mRNA水平顯著下調(diào)，說(shuō)明NF-Y和Sp1均能夠
豬CYP3A基因的表達(dá)。CCAAT box和GC box在DNA上的位置很近，研究者改變二者的距離，并檢測(cè)CYP3A基因的啟動(dòng)子活性，發(fā)現(xiàn)延長(zhǎng)或縮短它們之間的距離都會(huì)
，這一結(jié)果支持了NF-Y和Sp1通過(guò)互作共同發(fā)揮調(diào)控功能的推測(cè)。
（4）N-乙酰葡萄糖胺轉(zhuǎn)移酶（OGT）促進(jìn)Sp1的糖基化修飾水平，抑制Sp1的轉(zhuǎn)錄調(diào)控功能；O-糖苷酶（OGA）可以使Sp1去糖基化修飾，增強(qiáng)Sp1與互作蛋白的互作。研究者用T-2毒素處理豬肝細(xì)胞，檢測(cè)OGT和OGA的表達(dá)量，結(jié)果如圖3。結(jié)合圖3及上述系列實(shí)驗(yàn)結(jié)果，請(qǐng)闡述T-2毒素進(jìn)入豬體內(nèi)后的代謝調(diào)控機(jī)制。
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