科研人員通過轉基因技術培育出超量表達P蛋白的轉基因甜玉米。在超量表達P基因載體的構建中,含P基因的DNA片段以及Ti質粒的酶切位點如圖所示,其中強啟動子能驅動基因的持續(xù)轉錄。請回答下列問題。

限制酶 | 識別序列 |
ClaⅠ | 5′-AT↓CGAT-3′ |
BamHⅠ | 5′-G↓GATCC-3′ |
HindⅢ | 5′-A↓AGCTT-3′ |
EcoRⅠ | 5′-G↓AATTC-3′ |
KpnⅠ | 5′-GGTAC↓C-3′ |
SacⅠ | 5′-GAGCT↓C-3′ |
dNTP 能為子鏈延伸過程提供能量和原料(或脫氧核苷酸只能作為原料而不能提供能量)
dNTP 能為子鏈延伸過程提供能量和原料(或脫氧核苷酸只能作為原料而不能提供能量)
,同時需加入的酶有 逆轉錄酶和 Taq酶
逆轉錄酶和 Taq酶
。為了特異性擴增P基因序列,需根據 P基因兩端的堿基序列
P基因兩端的堿基序列
設計特異性引物。(2)在構建基因表達載體時,應優(yōu)先選用的限制酶是
BamHⅠ
BamHⅠ
和 Sac I
Sac I
,這樣操作不僅使P基因在玉米植株中超量表達,還可利用T-DNA的 可轉移
可轉移
特性,最終使P基因 整合到玉米細胞染色體上
整合到玉米細胞染色體上
。(3)將農桿菌液浸泡過的玉米愈傷組織進行植物組織培養(yǎng)時,培養(yǎng)基中需加入
潮霉素
潮霉素
,篩選出的愈傷組織經再分化過程形成叢芽,最終獲得轉基因玉米植株。(4)對轉基因再生玉米植株進行鑒定時發(fā)現,有些植株雖有P基因,但幾乎沒有P蛋白,造成該現象的原因可能有
基因轉化過程中強啟動子可能丟失或斷裂,未能真正轉化成功;雖然轉化成功,但是P基因保持沉默,不能有效表達
基因轉化過程中強啟動子可能丟失或斷裂,未能真正轉化成功;雖然轉化成功,但是P基因保持沉默,不能有效表達
。【考點】基因工程的操作過程綜合.
【答案】dNTP 能為子鏈延伸過程提供能量和原料(或脫氧核苷酸只能作為原料而不能提供能量);逆轉錄酶和 Taq酶;P基因兩端的堿基序列;BamHⅠ;Sac I;可轉移;整合到玉米細胞染色體上;潮霉素;基因轉化過程中強啟動子可能丟失或斷裂,未能真正轉化成功;雖然轉化成功,但是P基因保持沉默,不能有效表達
【解答】
【點評】
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