玉米是我國乃至全球總產(chǎn)量最高的糧食作物，玉米植株一般為雌雄同株異花，同時(shí)也存在只有雄花序的雄株和只有雌花序的雌株。玉米的性別由獨(dú)立遺傳的兩對等位基因（E/e和T/t）控制；其中E和T同時(shí)存在時(shí)，表現(xiàn)為雌雄同株異花；僅有T而沒有E時(shí)，表現(xiàn)為雄株；t隱性純合時(shí)，表現(xiàn)為雌株。
（1）選取雌雄同株純合子和雌株進(jìn)行雜交，獲得F₁后自交得到F₂。若F₂中不出現(xiàn)雄株，則親本的基因型分別為

EETT×EEtt

EETT×EEtt

；若F₂中出現(xiàn)

3

16

雄株，則親本的基因型分別為

EETT×eett

EETT×eett

。
（2）若一雄株與一雌株雜交，子代中雌株占

1

2

，則親本可能的基因型有

eeTt×Eett或eeTt×eett或eeTt×EEtt

eeTt×Eett或eeTt×eett或eeTt×EEtt

（寫出兩種基因型組合）。
（3）培育抗除草劑玉米可有效降低玉米種植中的勞動總量。草甘膦是目前世界上使用最廣泛的除草劑，EPSPS基因是常用的抗草甘膦基因。分析回答下列問題：
①EPSPS基因某條鏈的末端序列如圖1：

采用PCR技術(shù)獲取和擴(kuò)增EPSPS基因時(shí)，所需要的兩種引物序列分別為

5'-CTTGGATGAT-3'和5'-TCTGTTGAAT-3'

5'-CTTGGATGAT-3'和5'-TCTGTTGAAT-3'

（標(biāo)出5'和3'端）。
②如表為相關(guān)限制酶及其識別序列，圖2為經(jīng)切割得到的目的基因及末端（除黏性末端序列外，其他堿基序列省略），圖3為所使用的質(zhì)粒，其中Tet^r、Amp^r為標(biāo)記基因。

限制酶	BamHⅠ	BclⅠ	SmaⅠ	Sau3AⅠ
識別位點(diǎn)及切割位點(diǎn)	-G↓GATCC-	-T↓GATCG-	-CCC↓GGG-	-↓GATC-

據(jù)圖3可知，將EPSPS基因?qū)胗衩准?xì)胞的方法為

農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法

農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法

；對質(zhì)粒進(jìn)行酶切應(yīng)選用的兩種限制酶為

BclⅠ和SmaⅠ

BclⅠ和SmaⅠ

。
③用重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化玉米幼胚后，向培養(yǎng)基中加入草甘膦篩選出成功導(dǎo)入目的基因的幼胚。提取培養(yǎng)后的植株DNA，進(jìn)行目的基因的檢測和鑒定，從玉米細(xì)胞提取DNA過程中，加入預(yù)冷的酒精的目的是

析出DNA（使DNA形成沉淀）

析出DNA（使DNA形成沉淀）

。
④如表為鑒定含EPSPS基因植株的4種方法。預(yù)測同一后代群體中，4種方法檢出的含EPSPS基因植株的比例從小到大依次是

X₄、X₃、X₂、X₁

X₄、X₃、X₂、X₁

。

方法	檢測對象	檢測目標(biāo)	檢出的含G基因植株的比例
PCR擴(kuò)增	基因組DNA	EPSPS基因	X1
分子雜交	總mRNA	EPSPS基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物	X2
抗原—抗體雜交	總蛋白質(zhì)	EPSPS基因編碼的蛋白質(zhì)	X3
噴灑除草劑	幼苗	抗草甘膦幼苗	X4