人血清白蛋白(HSA)具有重要的醫(yī)用價值??蒲腥藛T通過生物工程技術(shù)獲得轉(zhuǎn)HSA 基因奶牛,并通過乳腺生物反應器生產(chǎn)HSA,其主要技術(shù)流程如圖1所示。請分析并回答下列問題:
(1)圖1中為獲取大量的去核卵母細胞,往往需對相應母牛使用促性腺激素促性腺激素處理,使其超數(shù)排卵,收集并選取處在減數(shù)第二次分裂中期減數(shù)第二次分裂中期時期的卵母細胞,通過顯微操作去除細胞核。供核的牛胎兒成纖維細胞通常選用傳代 10 代以內(nèi)的細胞,其原因是(10 代以內(nèi)的細胞)能保持正常的二倍體核型(10 代以內(nèi)的細胞)能保持正常的二倍體核型。
(2)胚胎移植時,為使代孕母牛能處于適合的生理狀態(tài),需要用激素對其進行同期發(fā)情同期發(fā)情處理。為獲得更多轉(zhuǎn)基因母牛,可在胚胎移植前對胚胎進行分割分割。
(3)SRY-PCR法性別鑒定的基本程序是:提取牛胎兒成纖維細胞的DNA,經(jīng)PCR 反應體系擴增SRY基因(Y 染色體上特有的性別決定基因)片段,然后對擴增產(chǎn)物進行檢測。
①PCR反應體系中通常含有模板DNA、引物、Taq酶、dNTP(dATP、dCTP、dGTP、dTTP)dNTP(dATP、dCTP、dGTP、dTTP)、緩沖液等。根據(jù)SRY基因序列設計的引物長度一般為20~24個核苷酸,其不宜過短的原因主要是防止引物隨機結(jié)合(或引物的特異性差)防止引物隨機結(jié)合(或引物的特異性差),兩種引物中G+C的含量相差不宜過大,原因主要是G+C的含量差別過大,低溫復性溫度難于統(tǒng)一G+C的含量差別過大,低溫復性溫度難于統(tǒng)一。
②PCR 一般要經(jīng)歷三十多次循環(huán),每次循環(huán)可以分為變性、復性復性和延伸三步。在循環(huán)之前,常要進行一次預變性,其目的是以便增加大分子模板DNA徹底變性的概率以便增加大分子模板DNA徹底變性的概率。
③細胞核內(nèi)DNA的復制過程如圖2 所示,其中有一條子鏈是先合成短的脫氧核苷酸鏈片段(稱為岡崎片段),再形成較長的分子,而在PCR過程中無岡崎片段形成的原因是DNA子鏈的延長方向只能是5'→3',細胞內(nèi)是邊解旋邊復制,PCR中復制過程是先完全解旋再復制DNA子鏈的延長方向只能是5'→3',細胞內(nèi)是邊解旋邊復制,PCR中復制過程是先完全解旋再復制。
④若擴增產(chǎn)物含大量SRY基因片段,則該種牛胎兒成纖維細胞不能不能(填“能”或“不能”)用作技術(shù)流程中轉(zhuǎn)化過程的受體細胞。
【答案】促性腺激素;減數(shù)第二次分裂中期;(10 代以內(nèi)的細胞)能保持正常的二倍體核型;同期發(fā)情;分割;dNTP(dATP、dCTP、dGTP、dTTP);防止引物隨機結(jié)合(或引物的特異性差);G+C的含量差別過大,低溫復性溫度難于統(tǒng)一;復性;以便增加大分子模板DNA徹底變性的概率;DNA子鏈的延長方向只能是5'→3',細胞內(nèi)是邊解旋邊復制,PCR中復制過程是先完全解旋再復制;不能
【解答】
【點評】
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