在菲律賓首都馬尼拉郊外的田野里，一種被稱為“金色大米”的轉(zhuǎn)基因水稻已經(jīng)悄然收獲．這種轉(zhuǎn)基因大米可以幫助人們補充每天必須的維生素A．由于含有可以生成維生素A的β一胡蘿卜素．它呈現(xiàn)金黃色澤，故稱“金色大米”．“金色大米”的培育流程如圖所示．請回答下列問題（已知酶Ⅰ的識別序列和切點是-G↓GATCC-，酶Ⅱ的識別序列和切點是-↓GATC-）．

（1）培育“金色大米”的基因工程操作四步曲中，其核心是

基因表達載體的構(gòu)建

基因表達載體的構(gòu)建

．通過該操作形成了圖中的

c

c

（填字母），它的構(gòu)成至少包括

目的基因、啟動子、終止子、標記基因

目的基因、啟動子、終止子、標記基因

等．
（2）在研究過程中獲取了目的基因后采用

PCR

PCR

技術(shù)進行擴增，在構(gòu)建c過程中目的基因用

限制酶Ⅱ

限制酶Ⅱ

（限制酶Ⅰ或限制酶Ⅱ）進行了切割，檢驗重組載體導(dǎo)入能否成功需要利用

基因Ⅰ

基因Ⅰ

作為標記基因．
（3）過程d通常采用

花粉管通道法

花粉管通道法

方法，過程e運用了

植物組織培養(yǎng)

植物組織培養(yǎng)

技術(shù)，在該技術(shù)應(yīng)用的過程中，關(guān)鍵步驟是利用含有一定營養(yǎng)和激素的培養(yǎng)基誘導(dǎo)植物細胞進行

脫分化

脫分化

和

再分化

再分化

．
（4）若希望該轉(zhuǎn)基因水稻生產(chǎn)的“金色大米”含維生素A含量更高、效果更好，則需要用過

蛋白質(zhì)

蛋白質(zhì)

工程手段對合成維生素A的相關(guān)基因進行設(shè)計，該工程是一項難度很大的工程，目前成功的例子不多，主要的原因是

因為蛋白質(zhì)的高級結(jié)構(gòu)十分復(fù)雜，目前對很多蛋白質(zhì)的高級結(jié)構(gòu)還不了解

因為蛋白質(zhì)的高級結(jié)構(gòu)十分復(fù)雜，目前對很多蛋白質(zhì)的高級結(jié)構(gòu)還不了解

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