（一）下列是高產(chǎn)蛋白酶的枯草芽孢桿菌的篩選過程，回答下列問題：
（1）配置脫脂牛奶固體培養(yǎng)基時脫脂牛奶需單獨用 112℃滅菌的原因是

既能將牛奶中的雜菌殺滅又不會過多破壞牛奶中的營養(yǎng)成分

既能將牛奶中的雜菌殺滅又不會過多破壞牛奶中的營養(yǎng)成分

，推測還可用

過濾滅菌

過濾滅菌

方法達(dá)到相同的目的。配置該培養(yǎng)基還需調(diào)節(jié) pH 為

中性偏堿

中性偏堿

。
（2）取三個不同地點的土樣，用無菌水稀釋。分別取 10^-4、10^-5、10^-6 三個稀釋度涂布到篩選平板中，每個稀釋度做 3 個重復(fù)。
（3）將得到的平板

倒置

倒置

于 30℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 24h。觀察平板上的菌落，用接種環(huán)挑取

透明圈大的/透明圈直徑與菌落直徑比值大

透明圈大的/透明圈直徑與菌落直徑比值大

的菌落中的菌種在脫脂牛奶平板上進(jìn)行劃線分離，以進(jìn)一步

分離純化

分離純化

。最后將分離出的單菌落接種到

A

A

（ A.LB 固體斜面培養(yǎng)基B.LB 固體平板培養(yǎng)基C.馬鈴薯蔗糖斜面培養(yǎng)基D.馬鈴薯蔗糖平板培養(yǎng)基）中，于 30℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 24 h 后，放入 4℃冰箱中保存。
（二）番茄黃化曲葉病毒（TYLCV）是一類單鏈環(huán)狀 DNA 病毒，能引發(fā)番茄黃化曲葉病。檢測某番茄幼苗是否感染該病毒，實驗人員進(jìn)行以下操作：①分析 PCR 擴增結(jié)果；②從番茄幼苗組織樣本中提取 DNA；③利用 PCR 擴增 DNA 片段；④采集番茄幼苗葉片組織樣本?；卮鹣铝袉栴}：
（1）若要得到正確的檢測結(jié)果，正確的操作順序應(yīng)該是

④②③①

④②③①

（用數(shù)字序號表示）。
（2）步驟②在番茄研磨液中加入 2mol/L 的氯化鈉，作用是

溶解DNA

溶解DNA

；研磨液中的乙二胺四乙酸二鈉（EDTA）的作用是

抑制DNA酶活性，防止DNA被酶解

抑制DNA酶活性，防止DNA被酶解

。
（3）操作③中使用的酶是

Taq DNA聚合酶（耐高溫的DNA聚合酶）

Taq DNA聚合酶（耐高溫的DNA聚合酶）

。PCR 反應(yīng)中每次循環(huán)可分為變性、退火、

延伸

延伸

三步。
（4）PCR 擴增得到的產(chǎn)物進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳后的結(jié)果如圖：

注：M：DNA marker；1-4：空白對照、陰性對照、陽性對照、樣品實驗中，DNA marker 是一組

已知長度和含量的標(biāo)準(zhǔn)DNA片段

已知長度和含量的標(biāo)準(zhǔn)DNA片段

的混合物，起參照作用。

健康番茄幼苗的DNA

健康番茄幼苗的DNA

是陰性對照組，TYLCV 的 DNA 是陽性對照組。若想利用該樣品植株獲得無病毒的番茄幼苗，方法是

取莖尖、芽尖等幼嫩組織部位進(jìn)行植物組織培養(yǎng)

取莖尖、芽尖等幼嫩組織部位進(jìn)行植物組織培養(yǎng)

。