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苯丙酮尿癥是單基因遺傳病，科學(xué)家將正?；駾導(dǎo)入該病患者的細胞，以治療該病。圖甲為A、B、C三種質(zhì)粒，圖乙為含有目的基因D的DNA片段，圖丙為重組載體的示意圖。Ap為氨芐青霉素抗性基因，Tc為四環(huán)素抗性基因，lacZ為藍色顯色基因，其表達產(chǎn)物可以將無色化合物X-gal轉(zhuǎn)化成藍色物質(zhì)，使菌落呈藍色、而非白色，EcoRI（0.6Kb）、PvuI（0.8Kb）為限制酶及其切割位點與復(fù)制原點之間的距離?；卮鹣铝袉栴}：
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（1）基因工程操作的核心步驟是
基因表達載體的構(gòu)建
基因表達載體的構(gòu)建
。圖甲中三種質(zhì)粒適宜作為運載體的是質(zhì)粒
B
B
，與另外兩種質(zhì)粒相比，其作為載體的優(yōu)點是
有標(biāo)記基因，復(fù)制原點不會被限制酶切割
有標(biāo)記基因，復(fù)制原點不會被限制酶切割
。
（2）獲取目的基因D時應(yīng)選擇乙圖中的
PvuⅠ
PvuⅠ
對其所在的DNA進行切割。如果僅知道D基因首尾的部分核苷酸序列，根據(jù)D基因已知核苷酸序列合成
引物
引物
，利用PCR擴增目的基因。
（3）將目的基因D和甲圖中相應(yīng)質(zhì)粒連接后，得到圖丙中三種方式。為選出正向連接的重組質(zhì)粒，使用
EcoRⅠ
EcoRⅠ
對質(zhì)粒單酶切后，進行電泳分析。若是正向連接載體，電泳圖譜中出現(xiàn)長度為
1.2
1.2
Kb和
5.5
5.5
Kb兩條帶。
（4）利用自身不含lacZ基因且對抗生素敏感的大腸桿菌作為受體細胞，要在已轉(zhuǎn)化的含重組質(zhì)粒、已轉(zhuǎn)化的含空質(zhì)粒的受體細胞和未轉(zhuǎn)化成功的細胞中篩選出已轉(zhuǎn)化的含重組質(zhì)粒的受體細胞的方法是：在含有
氨芐青霉素和X-gal
氨芐青霉素和X-gal
的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，形成
白
白
色菌落的為導(dǎo)入重組質(zhì)粒的受體細胞。

【答案】基因表達載體的構(gòu)建；B；有標(biāo)記基因，復(fù)制原點不會被限制酶切割；PvuⅠ；引物；EcoRⅠ；1.2；5.5；氨芐青霉素和X-gal；白
【解答】
【點評】
聲明：本試題解析著作權(quán)屬菁優(yōu)網(wǎng)所有，未經(jīng)書面同意，不得復(fù)制發(fā)布。
發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：32引用：1難度：0.5
相似題

  • 1．基因工程在農(nóng)牧業(yè)、醫(yī)藥衛(wèi)生和食品工業(yè)等多方面的應(yīng)用發(fā)展迅速，如圖表示利用基因工程技術(shù)生產(chǎn)人血清白蛋白的兩條途徑。下列敘述錯誤的是（　?。?br />菁優(yōu)網(wǎng)

    發(fā)布：2024/11/14 7:0:1組卷：62引用：7難度：0.7

  • 2．經(jīng)由食物攝取過量生物胺會引起頭痛、胃腸道不適和過敏等不良反應(yīng)，嚴重時甚至危及生命，因此必須對食品中生物胺的含量進行減控。微生物來源的多銅氧化酶（MCO）能高效分解生物胺，基于基因工程規(guī)?；a(chǎn)重組MCO在食品工業(yè)中具有廣泛用途。我國科研人員采用PCR技術(shù)獲得發(fā)酵乳桿菌的MCO基因，然后轉(zhuǎn)入大腸桿菌中實現(xiàn)了高效表達。
    （1）通過上述基因工程技術(shù)獲取目標(biāo)產(chǎn)物，涉及如下步驟，則合理的操作步驟排序是
     
    （填寫下列編號）。
    ①篩選和鑒定含目的基因的受體細胞
    ②選用合適的方法獲取目的基因
    ③借助發(fā)酵工程規(guī)模化生產(chǎn)目標(biāo)蛋白
    ④目的基因?qū)胧荏w細胞
    ⑤目的基因和運載體重組構(gòu)建表達載體
    （2）在PCR過程中，引物的功能是
     
    。
    A．啟動DNA復(fù)制
    B．規(guī)定擴增區(qū)間
    C．解旋DNA雙鏈
    D．充當(dāng)復(fù)制模板
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    （3）為獲得目的基因MCO（圖甲灰色表示的序列），正確設(shè)計的PCR引物應(yīng)為圖甲中的
     
    。
    （4）獲取目的基因后，需要和載體重組導(dǎo)入受體細胞。載體的化學(xué)本質(zhì)是
     
    （填DNA或RNA/DNA或RNA）。
    （5）在常規(guī)PCR的每一輪擴增反應(yīng)中，溫度隨時間的變化順序是圖乙中的
     
    。
    （6）若目的基因MCO經(jīng)限制酶切開后呈圖丙中圖2所示的末端，那么載體質(zhì)粒pCLY15（圖丙中圖1）需用
     
    和
     
    切開，才能與MCO片段高效連接。
    （7）下列實驗操作中，能有效鑒別載體質(zhì)粒pCLY15空載還是“滿載”的是
     
    。
    A．從抗藥性克隆中提取質(zhì)粒DNA，用合適的限制酶切割
    B．在選擇培養(yǎng)基中添加X-gal試劑，以克隆的顏色進行鑒別
    C．從抗藥性克隆中提取質(zhì)粒DNA，以此為模板進行PCR檢測
    D．將Ap抗性克隆轉(zhuǎn)移至含Tc（四環(huán)素）的平板上，根據(jù)大腸桿菌生長與否加以鑒別

    發(fā)布：2024/11/14 4:30:2組卷：29引用：3難度：0.5

  • 3．用限制酶EcoRⅤ單獨切割某普通質(zhì)粒，可產(chǎn)生14kb（1kb即1000個堿基對）的長鏈，而同時用限制酶EcoRⅤ、MboⅠ聯(lián)合切割該質(zhì)粒，可得到三種長度的DNA片段，見圖（其中*表示EcoRⅤ限制酶切割后的一個黏性末端）。
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    若用MboⅠ限制酶單獨切割該普通質(zhì)粒，則產(chǎn)生的DNA片段的長度為（　　）

    發(fā)布：2024/11/14 4:0:2組卷：89引用：9難度：0.7
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