油菜素內(nèi)酯（BR）是一類重要的植物激素，在水稻株型和粒型調(diào)控中起重要作用。
（1）BR通過與

受體

受體

結(jié)合，將

信息

信息

傳遞給靶細(xì)胞，從而調(diào)節(jié)植物的生命活動。
（2）研究者篩選到一個DS1基因突變株系，其表型植株矮化，葉夾角（葉片與莖稈夾角）小、籽粒小等與內(nèi)源BR水平降低的突變體表型非常類似。為探究相關(guān)DS1基因是否參與調(diào)控BR信號通路，研究者對野生型與DS1基因突變體葉夾角進(jìn)行了測算，結(jié)果如圖1。
研究者分析圖1結(jié)果后認(rèn)為：DS1基因的表達(dá)產(chǎn)物參與調(diào)控BR信號通路。得出此結(jié)論的依據(jù)為：

隨BR處理濃度的增加，DS1基因突變體的葉夾角增加趨勢較小，且最終趨于穩(wěn)定

隨BR處理濃度的增加，DS1基因突變體的葉夾角增加趨勢較小，且最終趨于穩(wěn)定

。
（3）研究證實DS1基因的表達(dá)產(chǎn)物DS1蛋白存在1個與其他蛋白相互作用的特殊結(jié)構(gòu)。研究者借助數(shù)據(jù)庫分析，預(yù)測A類蛋白是與DSl蛋白相互作用的蛋白質(zhì)，繼而利用酵母雙雜交技術(shù)進(jìn)行了探究（相關(guān)技術(shù)原理如圖2所示）。

注：若目標(biāo)蛋白A能與DSI相互作用，則會使BD與AD在結(jié)構(gòu)及功能上互補，繼而啟動下游報告基因LacZ的表達(dá)，相關(guān)酵母菌菌落使用X-gal物質(zhì)染色后呈藍(lán)色，否則呈白色
①結(jié)合圖3及表格信息，若將DS1基因連入載體pGBKT7，可選擇

EcoRⅠ和SalⅠ

EcoRⅠ和SalⅠ

限制酶對兩者進(jìn)行酶切，以保證DS1基因與pGBKT7正向連接，并降低酶切產(chǎn)物間的自身環(huán)化比例，之后再利用

DNA連接

DNA連接

酶連接，獲得產(chǎn)物BD-DS1。

限制酶	NdeⅠ	EcoRⅠ	SmaⅠ	SalⅠ
識別序列

②構(gòu)建表達(dá)載體AD-A后，將各載體共導(dǎo)入酵母菌細(xì)胞，實驗處理如表2。
表2

組別	共導(dǎo)入的表達(dá)載體		預(yù)測結(jié)果
對照組2	BD-Dsl	AD	白色
對照組3	Ⅰ BD BD	Ⅱ AD-Dsl AD-Dsl	白色
實驗組	BD-Dsl	Ⅱ AD-A AD-A

結(jié)合酵母雙雜交技術(shù)的原理，完成表中對應(yīng)內(nèi)容的填寫；Ⅰ

BD

BD

；Ⅱ

AD-Dsl

AD-Dsl

。
③若實驗組結(jié)果為藍(lán)色，說明

A類蛋白是與DSl蛋白相互作用的蛋白質(zhì)

A類蛋白是與DSl蛋白相互作用的蛋白質(zhì)

。
利用此方法研究者篩選出了與DS1蛋白相互作用的生長素響應(yīng)因子ARFI1蛋白，并通過其他實驗進(jìn)一步驗證二者確實存在相互作用。
（4）后續(xù)研究表明，ARFI1可以直接結(jié)合到BR受體基因BRII的啟動子上。請從分子水平上解釋DS1基因突變的株系對BR的敏感性降低的原因：

RFI1可以直接結(jié)合到BR受體基因BRII的啟動子上，導(dǎo)致BR受體基因不能表達(dá)

RFI1可以直接結(jié)合到BR受體基因BRII的啟動子上，導(dǎo)致BR受體基因不能表達(dá)

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