2019年底,新冠肺炎在我國大面積流行。病原體為一種新型RNA冠狀病毒,即2019-nCoV??蒲腥藛T以病毒表面S蛋白作為主要的病毒抗原,擬利用基因工程研制新冠病毒重組蛋白疫苗用于接種預防。圖1表示病毒S蛋白的基因,圖2表示取自真菌細胞的質(zhì)粒PcMV及其上部分限制酶切位點,圖3表示疫苗制作的簡要操作流程。
(1)圖3中步驟①所需要的酶和原料是
逆轉(zhuǎn)錄酶和四種脫氧核苷酸
逆轉(zhuǎn)錄酶和四種脫氧核苷酸
。步驟②需要的酶是限制酶和
DNA連接酶
DNA連接酶
。
(2)圖1中不能選擇EcoRI和AccI兩種限制酶切割S蛋白基因,原因是
這兩種酶在S蛋白基因上有切割位點會破壞S蛋白基因的完整性
這兩種酶在S蛋白基因上有切割位點會破壞S蛋白基因的完整性
。現(xiàn)在科研人員已經(jīng)可以根據(jù)需要在目的基因兩端添加需要的限制酶切割位點序列,但是一般不在目的基因的兩端添加同一種酶切位點,原因是
防止目的基因(S蛋白基因)自身連接或反向連接在質(zhì)粒上
防止目的基因(S蛋白基因)自身連接或反向連接在質(zhì)粒上
。若選擇兩種酶且位點序列添加在S蛋白基因的左右兩端(考慮轉(zhuǎn)錄的方向)應(yīng)分別選擇
ApaⅠ和SolⅠ
ApaⅠ和SolⅠ
。
(3)PcMV質(zhì)粒上氨芐青霉素抗性基因的作用是
篩選和檢測表達載體是否導入受體細胞
篩選和檢測表達載體是否導入受體細胞
。
(4)將表達載體導入動物細胞中進行培養(yǎng)的原因是
PcMV質(zhì)粒取自真菌,屬真核細胞,導入動物細胞中易于基因的表達
PcMV質(zhì)粒取自真菌,屬真核細胞,導入動物細胞中易于基因的表達
。為了檢驗表達的S蛋白是否與病毒S蛋白有相同的免疫反應(yīng)特性,可用S蛋白與新冠病毒肺炎康復患者血清進行
抗原-抗體雜交
抗原-抗體雜交
實驗,進行檢測。