2019年底,新冠肺炎在我國大面積流行。病原體為一種新型RNA冠狀病毒,即2019-nCoV??蒲腥藛T以病毒表面S蛋白作為主要的病毒抗原,擬利用基因工程研制新冠病毒重組蛋白疫苗用于接種預防。圖1表示病毒S蛋白的基因,圖2表示取自真菌細胞的質粒PcMV及其上部分限制酶切位點,圖3表示疫苗制作的簡要操作流程。
(1)圖3中步驟①所需要的酶和原料是 逆轉錄酶和四種脫氧核苷酸逆轉錄酶和四種脫氧核苷酸。步驟②需要的酶是限制酶和 DNA連接酶DNA連接酶。
(2)圖1中不能選擇EcoRI和AccI兩種限制酶切割S蛋白基因,原因是 這兩種酶在S蛋白基因上有切割位點會破壞S蛋白基因的完整性這兩種酶在S蛋白基因上有切割位點會破壞S蛋白基因的完整性?,F在科研人員已經可以根據需要在目的基因兩端添加需要的限制酶切割位點序列,但是一般不在目的基因的兩端添加同一種酶切位點,原因是 防止目的基因(S蛋白基因)自身連接或反向連接在質粒上防止目的基因(S蛋白基因)自身連接或反向連接在質粒上。若選擇兩種酶且位點序列添加在S蛋白基因的左右兩端(考慮轉錄的方向)應分別選擇 ApaⅠ和SolⅠApaⅠ和SolⅠ。
(3)PcMV質粒上氨芐青霉素抗性基因的作用是 篩選和檢測表達載體是否導入受體細胞篩選和檢測表達載體是否導入受體細胞。
(4)將表達載體導入動物細胞中進行培養(yǎng)的原因是 PcMV質粒取自真菌,屬真核細胞,導入動物細胞中易于基因的表達PcMV質粒取自真菌,屬真核細胞,導入動物細胞中易于基因的表達。為了檢驗表達的S蛋白是否與病毒S蛋白有相同的免疫反應特性,可用S蛋白與新冠病毒肺炎康復患者血清進行 抗原-抗體雜交抗原-抗體雜交實驗,進行檢測。
【考點】基因工程的操作過程綜合.
【答案】逆轉錄酶和四種脫氧核苷酸;DNA連接酶;這兩種酶在S蛋白基因上有切割位點會破壞S蛋白基因的完整性;防止目的基因(S蛋白基因)自身連接或反向連接在質粒上;ApaⅠ和SolⅠ;篩選和檢測表達載體是否導入受體細胞;PcMV質粒取自真菌,屬真核細胞,導入動物細胞中易于基因的表達;抗原-抗體雜交
【解答】
【點評】
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