Cre酶是一種重組酶,LoxP是能被Cre酶識(shí)別的特異DNA序列。Cre/LoxP重組酶系統(tǒng)能夠?qū)崿F(xiàn)特異位點(diǎn)的基因敲除、基因插入等操作。
(1)一般而言,當(dāng)一條DNA鏈上存在兩個(gè)相同的LoxP序列且方向相同時(shí),Cre酶能有效切除兩個(gè)位點(diǎn)間的DNA序列,如圖1所示。
①Cre酶與限制酶的功能類似,能將特定部位的兩個(gè)核苷酸之間的 磷酸二酯鍵磷酸二酯鍵斷開(kāi)。
②在無(wú)Cre酶存在的細(xì)胞中,轉(zhuǎn)錄終止信號(hào)序列抑制下游GFP基因起作用,無(wú)法發(fā)出熒光。若細(xì)胞中含有Cre酶,Cre酶就會(huì) 切除轉(zhuǎn)錄終止信號(hào)序列切除轉(zhuǎn)錄終止信號(hào)序列,GFP基因就會(huì) 轉(zhuǎn)錄和翻譯(或“表達(dá)“)轉(zhuǎn)錄和翻譯(或“表達(dá)“),合成綠色熒光蛋白。
(2)當(dāng)細(xì)胞中存在多對(duì)Cre酶識(shí)別位點(diǎn)和熒光基因時(shí),只有在啟動(dòng)子之后且與啟動(dòng)子相鄰的熒光蛋白基因才會(huì)表達(dá),借助大腦成像技術(shù),通過(guò)熒光蛋白“點(diǎn)亮”大腦內(nèi)的神經(jīng)元,小鼠不同的腦組織細(xì)胞就會(huì)呈現(xiàn)不同的顏色,出現(xiàn)“腦彩虹”。
①研究者利用 限制酶和DNA連接限制酶和DNA連接酶構(gòu)建了含有熒光蛋白基因和Cre酶識(shí)別序列的基因表達(dá)載體(如圖2),利用 顯微注射顯微注射法將其導(dǎo)入小鼠細(xì)胞中,進(jìn)而培育出轉(zhuǎn)基因小鼠。
②若該小鼠腦細(xì)胞中不存在Cre酶,小鼠腦組織呈現(xiàn)的色彩為 綠色綠色。
③若該小鼠腦細(xì)胞中存在Cre酶時(shí),該小鼠一個(gè)腦細(xì)胞的色彩為 綠色或紅色或黃色或藍(lán)色綠色或紅色或黃色或藍(lán)色。
(3)兩個(gè)LoxP序列位于一條DNA鏈上且方向相反時(shí),Cre酶能誘導(dǎo)兩個(gè)LoxP位點(diǎn)間的序列翻轉(zhuǎn)。請(qǐng)?jiān)趫D3中畫出僅通過(guò)序列翻轉(zhuǎn)就能在腦組織中同時(shí)呈現(xiàn)四種顏色的基因表達(dá)載體模式圖(用最少的LoxP序列)。
【考點(diǎn)】基因工程的操作過(guò)程綜合.
【答案】磷酸二酯鍵;切除轉(zhuǎn)錄終止信號(hào)序列;轉(zhuǎn)錄和翻譯(或“表達(dá)“);限制酶和DNA連接;顯微注射;綠色;綠色或紅色或黃色或藍(lán)色
【解答】
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發(fā)布:2024/4/20 14:35:0組卷:16引用:1難度:0.6
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