In-Fusion技術是一項新型的無縫克隆技術。該技術關鍵是要在目的基因兩端構建與線性化質粒末端相同的DNA序列（即同源序列，通常為15～20bp），然后用In-Fusion酶處理即可實現(xiàn)無縫連接。它的操作步驟大致為：①質粒線性化；②PCR擴增出兩端含線性化質粒同源序列的目的基因；③目的基因與線性化質粒同源區(qū)域在In-Fusion酶的作用下形成重組質粒；④將重組質粒導入受體細胞。
（1）過程①中需要用到的酶是 TaqDNA聚合酶TaqDNA聚合酶。另外，利用 限制酶限制酶處理也可以直接得到線性化質粒。
（2）據(jù)圖分析，為保證擴增出所需的目的基因，引物A或引物B要依據(jù) 目的基因和質粒目的基因和質粒的堿基序列進行設計。過程②經(jīng)過 33輪循環(huán)即可初步得到符合要求的目的基因片段。
（3）過程③中，同源序列1、2的堿基排序不同，這樣設計的好處是 防止目的基因反向連接；防止線性化質?；蚰康幕虻淖陨憝h(huán)化防止目的基因反向連接；防止線性化質?；蚰康幕虻淖陨憝h(huán)化。圖示In-Fusion技術可作為模型使用，一般來說只需要改變圖中的 引物A和引物B引物A和引物B，即可快速構建出另一種目的基因的重組質粒。
（4）若目的基因是氨芐青霉素抗性基因，以大腸桿菌作為受體細胞。為檢測已轉化大腸桿菌的抗性效果，在含氨芐青霉素的液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)一段時間后，用顯微鏡計數(shù)法或 稀釋涂布平板稀釋涂布平板法進行計數(shù)，若計數(shù)結果分別是M、N，則致死率可用（M-N）/M×100%表示，通過后者來計數(shù)，此結果較真實值偏大，原因是 在用稀釋涂布平板法計數(shù)時，當兩個或多個細胞連在一起時，在平板上觀察到的是一個菌落在用稀釋涂布平板法計數(shù)時，當兩個或多個細胞連在一起時，在平板上觀察到的是一個菌落。
【考點】基因工程的操作過程綜合；DNA片段的擴增與電泳鑒定．
【答案】TaqDNA聚合酶；限制酶；目的基因和質粒；3；防止目的基因反向連接；防止線性化質粒或目的基因的自身環(huán)化；引物A和引物B；稀釋涂布平板；在用稀釋涂布平板法計數(shù)時，當兩個或多個細胞連在一起時，在平板上觀察到的是一個菌落
【解答】
【點評】
聲明：本試題解析著作權屬菁優(yōu)網(wǎng)所有，未經(jīng)書面同意，不得復制發(fā)布。
發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：17引用：2難度：0.5
相似題
-
1．下列有關基因工程技術和蛋白質工程技術敘述正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：6引用：1難度：0.7 -
2．下列有關基因工程的敘述，正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2024/12/31 5:0:5組卷：3引用：2難度：0.7 -
3．幾丁質是許多真菌細胞壁的重要成分，幾丁質酶可催化幾丁質水解。通過基因工程將幾丁質酶基因轉入植物體內，可增強其抗真菌病的能力。回答下列問題：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得?；蛭膸彀?和。
（2）生物體細胞內的DNA復制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術擴增目的基因時，使反應體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當幾丁質酶基因和質粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學鍵是。
（4）提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉基因植株（幾丁質酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6
相關試卷