矮化育種能使水稻等作物品種具有抗倒伏和高產(chǎn)的優(yōu)良特性,但同時(shí)會(huì)引起所育品種的氮肥利用率降低。研究發(fā)現(xiàn),提高NGR5基因表達(dá)量既能保持矮化特征,又可以提高氮肥的利用率。為了進(jìn)一步研究NGR5蛋白提高氮肥利用率的作用機(jī)制,研究人員利用酵母菌進(jìn)行相關(guān)實(shí)驗(yàn)?;卮鹣铝袉栴}。
(1)酵母菌需要轉(zhuǎn)錄因子(一類蛋白質(zhì))才能開始轉(zhuǎn)錄過程,某種轉(zhuǎn)錄因子由BD(DNA 結(jié)合結(jié)構(gòu)域)和 AD(轉(zhuǎn)錄激活結(jié)構(gòu)域)兩部分組成,在具備相應(yīng)條件時(shí),BD與AD會(huì)靠攏并結(jié)合,激活特定基因的轉(zhuǎn)錄。據(jù)此推測,BD能識別特定基因前段的 堿基序列堿基序列 并與之結(jié)合,但不能激活轉(zhuǎn)錄過程,
(2)研究人員將NGR5基因連接到含有編碼BD多肽基因的表達(dá)載體中,隨后使用一定方法處理酵母菌細(xì)胞,并將該表達(dá)載體導(dǎo)入其中,使其能表達(dá) BD-NGR5融合蛋白BD-NGR5融合蛋白。
(3)提取水稻根部細(xì)胞的RNA,通過 PCR擴(kuò)增PCR擴(kuò)增 過程獲得大量的各種cDNA,隨后將不同的cDNA片段連接到含有編碼AD多肽基因的表達(dá)載體中,并導(dǎo)入上述酵母菌細(xì)胞,使其能表達(dá)不同的AD-Xn融合蛋白(“Xn”表示不同cDNA片段表達(dá)的多肽)。
(4)若Xn能與NGR5蛋白相互作用,則AD-Xn融合蛋白和BD-NGR5融合蛋白就會(huì)被牽引靠攏,促使BD與AD結(jié)合,激活標(biāo)記基因的表達(dá)。這能使酵母菌將培養(yǎng)基中的某特殊物質(zhì)轉(zhuǎn)化為藍(lán)色,因此可選擇 變藍(lán)變藍(lán) 的菌落進(jìn)行繼續(xù)研究。
(5)為尋找能與NGR5蛋白相互作用的蛋白質(zhì),研究人員最終完成的實(shí)驗(yàn)如表所示,設(shè)置3個(gè)對照組的目的分別是 確保BD與AD之間、BD-NGR5與AD之間、BD與AD-Xn之間不會(huì)相互作用確保BD與AD之間、BD-NGR5與AD之間、BD與AD-Xn之間不會(huì)相互作用。
組別 | 表達(dá)的蛋白(多肽)1 | 表達(dá)的蛋白(多肽)2 |
對照組1 | BD | AD |
對照組2 | BD-NGR5 | AD |
對照組3 | BD | AD-Xn |
實(shí)驗(yàn)組 | BD-NGR5 | AD-Xn |
【答案】堿基序列;BD-NGR5融合蛋白;PCR擴(kuò)增;變藍(lán);確保BD與AD之間、BD-NGR5與AD之間、BD與AD-Xn之間不會(huì)相互作用
【解答】
【點(diǎn)評】
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