大腸桿菌zntA基因和zntB基因編碼的Zn²⁺轉(zhuǎn)運蛋白A和B能將Zn²⁺排出細(xì)胞外，維持細(xì)胞內(nèi)Zn²⁺穩(wěn)態(tài)?？蒲腥藛T嘗試通過同源重組技術(shù)獲得zntA和zntB基因被敲除的突變株。如圖1是敲除zntA基因的主要流程，其中T3-Km^R質(zhì)粒中的P1-Km^R-P2是指Km^R（卡那霉素抗性基因）兩側(cè)帶有兩個通用引物位點P1和P2，AmP^r代表氨芐青霉素抗性基因。zntA基因兩側(cè)同源臂H1和H2的序列已標(biāo)注，請回答

（1）T3-Km^R質(zhì)粒中組成ori（復(fù)制原點）的基本單位是

脫氧核苷酸

脫氧核苷酸

。除引物1和引物2之外PCR反應(yīng)體系中還需要加入

熱穩(wěn)定的DNA聚合酶、四種脫氧核苷酸、模板鏈

熱穩(wěn)定的DNA聚合酶、四種脫氧核苷酸、模板鏈

等物質(zhì)。
（2）下列引物中的

a

a

、

b

b

（填字母）可作為引物1和引物2，其下劃線序列設(shè)計的依據(jù)是

P1和P2

P1和P2

。
a5’ATGTCGACTCCTGACAATCACGGCAAGAAAGCCCCTTGT3’
b5’TTATCTCCTGCGCAACAATCTTAACGCACTCGCTGTCGTAT3’
c5’TACAGCTGAGGACTGTTAGTGCCGTTCTTTCGCGGGTGTG3’
d5’AATAGAGGACGCGTTGTTAGAATTGCGTAAGCTACTCCAA3’
（3）將同源重組替換片段導(dǎo)入經(jīng)過

鈣離子

鈣離子

處理過的感受態(tài)細(xì)胞中。然后將轉(zhuǎn)化后的菌涂布在含有

氨芐青霉素

氨芐青霉素

的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，以篩選發(fā)生了同源重組的大腸桿菌。
（4）科研人員初步篩選獲得zntA基因敲除菌株KZA07、zntA和zntB基因均被敲除菌株KZAB04，并采用梯度稀釋平板點樣實驗比較它們對不同濃度Zn²⁺的耐受力，其生長的菌落結(jié)果如圖2；

①對照組應(yīng)該選擇

znt A和znt B基因沒有被敲除的

znt A和znt B基因沒有被敲除的

菌株，高濃度Zn²⁺培養(yǎng)條件下b組和c組菌株長勢不同的原因是

b組還有znt B基因編碼的Zn²⁺轉(zhuǎn)運蛋白B能將Zn²⁺排出細(xì)胞外，維持細(xì)胞內(nèi)Zn²⁺穩(wěn)態(tài)

b組還有znt B基因編碼的Zn²⁺轉(zhuǎn)運蛋白B能將Zn²⁺排出細(xì)胞外，維持細(xì)胞內(nèi)Zn²⁺穩(wěn)態(tài)

（2分）。
②在此基礎(chǔ)上，科學(xué)家進(jìn)行了Zn²⁺功能互補(bǔ)實驗：將CzcD（已經(jīng)被鑒定的具有Zn²⁺外排功能的蛋白質(zhì)）基因分別導(dǎo)入a、b、c三組菌株中，得到a1、b1、c1三組菌株，請預(yù)期在高濃度Zn²⁺培養(yǎng)條件下的實驗結(jié)果：a1組與a組菌株長勢無明顯差異，

b1組長勢比b組好，c1組長勢顯著比c組好

b1組長勢比b組好，c1組長勢顯著比c組好

。