鹽害是影響農(nóng)業(yè)生產(chǎn)的非生物脅迫因子之一,植物在高鹽脅迫下會(huì)產(chǎn)生大量H2O2和MDA(膜脂過氧化物)。LEA蛋白在植物遭受重大非生物脅迫時(shí)(如:鹽害)起到很大的保護(hù)作用,科研人員將耐鹽酵母LEA蛋白基因NLEAs導(dǎo)入大豆培育轉(zhuǎn)耐鹽基因大豆植株?;卮鹣铝袉栴}:
(1)為獲取NLEAS基因,可從酵母中提取總RNA,經(jīng)
逆轉(zhuǎn)錄
逆轉(zhuǎn)錄
過程得到cDNA,再經(jīng)PCR技術(shù)進(jìn)行大量擴(kuò)增。
(2)構(gòu)建基因表達(dá)載體過程需要用到的有關(guān)酶是 限制酶和DNA連接酶
限制酶和DNA連接酶
,若用同種酶切割載體后得到的一個(gè)末端序列為,則與該載體末端連接的NLEAS基因末端序列是 。構(gòu)建的基因表達(dá)載體中具有終止子,終止子是指 位于基因尾端,使轉(zhuǎn)錄終止的特殊DNA片段
位于基因尾端,使轉(zhuǎn)錄終止的特殊DNA片段
。
(3)將NLEAs基因?qū)氪蠖辜?xì)胞,常采用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法,農(nóng)桿菌的作用是 使目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞,并將目的基因整合到受體細(xì)胞染色體DNA上
使目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞,并將目的基因整合到受體細(xì)胞染色體DNA上
。
(4)科研人員從轉(zhuǎn)耐鹽NLEAs基因大豆根部提取到了大量LEA蛋白,但還是無法說明該基因工程操作是否成功,還需要從個(gè)體水平上設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)進(jìn)行驗(yàn)證,結(jié)合題干信息,寫出實(shí)驗(yàn)思路,預(yù)期實(shí)驗(yàn)結(jié)果 實(shí)驗(yàn)思路:將長(zhǎng)勢(shì)一致的野生型大豆和轉(zhuǎn)基因大豆幼苗種植在高鹽土壤中,一段時(shí)間后測(cè)定并比較兩種植株產(chǎn)生的H2O2和MDA含量
預(yù)期實(shí)驗(yàn)結(jié)果:轉(zhuǎn)基因大豆比野生型大豆產(chǎn)生的H2O2和MDA含量更少
實(shí)驗(yàn)思路:將長(zhǎng)勢(shì)一致的野生型大豆和轉(zhuǎn)基因大豆幼苗種植在高鹽土壤中,一段時(shí)間后測(cè)定并比較兩種植株產(chǎn)生的H2O2和MDA含量
預(yù)期實(shí)驗(yàn)結(jié)果:轉(zhuǎn)基因大豆比野生型大豆產(chǎn)生的H2O2和MDA含量更少
。【答案】逆轉(zhuǎn)錄;限制酶和DNA連接酶;
;位于基因尾端,使轉(zhuǎn)錄終止的特殊DNA片段;使目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞,并將目的基因整合到受體細(xì)胞染色體DNA上;實(shí)驗(yàn)思路:將長(zhǎng)勢(shì)一致的野生型大豆和轉(zhuǎn)基因大豆幼苗種植在高鹽土壤中,一段時(shí)間后測(cè)定并比較兩種植株產(chǎn)生的H
2O
2和MDA含量
預(yù)期實(shí)驗(yàn)結(jié)果:轉(zhuǎn)基因大豆比野生型大豆產(chǎn)生的H
2O
2和MDA含量更少