擬南芥中的生長(zhǎng)素運(yùn)輸?shù)鞍祝≒IN1）對(duì)生長(zhǎng)素的極性運(yùn)輸具有重要作用。為研究35S啟動(dòng)子（一種來自病毒的強(qiáng)啟動(dòng)子）能否引起下游基因的過量表達(dá)，研究人員將35S啟動(dòng)子與PINI基因轉(zhuǎn)入擬南芥，觀察PIN1過量表達(dá)對(duì)擬南芥的影響?；卮鹣铝袉栴}：
（1）研究人員獲取含PINl基因的mRNA后，通過逆轉(zhuǎn)錄獲得DNA，再以DNA為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增獲取PINI基因，該過程需要的原料是
4種脫氧核苷酸
4種脫氧核苷酸
。PCR循環(huán)時(shí)，首先需要將溫度上升到90℃，目的是 使雙鏈DNA 解聚為單鏈
使雙鏈DNA 解聚為單鏈
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（2）PCR擴(kuò)增PIN1基因時(shí)，需要兩種引物，據(jù)圖1分析，應(yīng)選擇引物 1、2
1、2
。圖1、2中的PstⅠ、EcoRⅠ、XhoⅠ表示限制酶，為使獲取的 PINl 基因與質(zhì)粒正確連接，根據(jù)圖1、2分析，應(yīng)當(dāng)選擇的限制酶是 PstⅠ、EcoRⅠ
PstⅠ、EcoRⅠ
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（3）獲取PINI基因后，需要將35S啟動(dòng)子與 PINI基因一起構(gòu)建為基因表達(dá)載體，35S啟動(dòng)子的作用是 作為RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合位點(diǎn)，驅(qū)動(dòng) PINI 基因轉(zhuǎn)錄出mRNA
作為RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合位點(diǎn)，驅(qū)動(dòng) PINI 基因轉(zhuǎn)錄出mRNA
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（4）為檢測(cè)目的基因是否導(dǎo)入擬南芥，在分子水平上，實(shí)驗(yàn)人員先從轉(zhuǎn)基因擬南芥的DNA中擴(kuò)增出35S啟動(dòng)子和PINl基因，然后采用電泳來鑒定35S啟動(dòng)子，但不鑒定 PINl基因，其理由是 擬南芥細(xì)胞中原本存在 PINI 基因，檢測(cè) PINI 基因無法確定外源 PIN1 基因是否導(dǎo)入受體細(xì)胞
擬南芥細(xì)胞中原本存在 PINI 基因，檢測(cè) PINI 基因無法確定外源 PIN1 基因是否導(dǎo)入受體細(xì)胞
。在個(gè)體水平上，還可以采取的檢測(cè)方法是 對(duì)轉(zhuǎn)基因擬南芥噴灑適宜濃度的除草劑，觀察其能否存活
對(duì)轉(zhuǎn)基因擬南芥噴灑適宜濃度的除草劑，觀察其能否存活
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