24.血凝素基因(HA)編碼的血凝素是構(gòu)成流感病毒囊膜纖突的主要成分。成熟的血凝素包含HA1和HA2兩個亞單位,其中HA1含有病毒與受體相互作用的位點(diǎn)。IgGFc基因片段(長度為717bp)編碼人IgG抗體中的一段小肽,常作為融合蛋白標(biāo)簽。蛋白質(zhì)分泌依賴于信號肽的引導(dǎo),本研究中用信號肽IL-2SS代替HA自身信號肽,科研人員嘗試構(gòu)建IL-2SS/HA1/IgGFc融合蛋白表達(dá)載體,并導(dǎo)入大腸桿菌表達(dá)和分泌,請回答:
(1)流感病毒囊膜主要由
組成,囊膜上血凝素的合成場所在
。
(2)本實(shí)驗(yàn)用信號肽IL-2SS代替HA自身信號肽有利于
,PCR擴(kuò)增目的基因時應(yīng)該選擇圖中引物
。
(3)設(shè)計(jì)引物時,不能包含基因HA1的終止密碼子的編碼序列,原因是
。引物序列的長度及
直接影響著PCR過程中退火溫度的設(shè)定。
(4)應(yīng)選擇限制酶
來切割質(zhì)粒A,然后直接將PCR產(chǎn)物與質(zhì)粒A混合,同時加入
酶,使得目的基因與質(zhì)粒A相連。若目的基因與質(zhì)粒A正向連接,用BamHⅠ和SacⅠ同時切割重組質(zhì)粒,完全酶切后的產(chǎn)物的長度約為
bp。
(5)融合蛋白中的標(biāo)簽蛋白有利于目的蛋白的分離和純化,基因工程生產(chǎn)HA1作為疫苗時,選擇人IgGFc作為標(biāo)簽的優(yōu)點(diǎn)還有
。