24.常見的探針有核酸探針和蛋白質(zhì)探針。兩種探針結(jié)構(gòu)和功能均不相同,故而應(yīng)用在不同的檢測中。而兩種探針的制備過程中所應(yīng)用的技術(shù)也不相同。請回答下列問題。
Ⅰ、蛋白質(zhì)探針的制備。
(1)蛋白質(zhì)探針常用
技術(shù)來制備。該技術(shù)的基本流程是將
注射給實(shí)驗(yàn)動物,獲取的脾細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合后,用HAT培養(yǎng)基篩選培養(yǎng)對象。該篩選過程得到的雜交瘤細(xì)胞是產(chǎn)生
的雜交瘤細(xì)胞,接下來要經(jīng)過
檢測來獲得產(chǎn)生特定蛋白的雜交瘤細(xì)胞。最終將純化得到的特定蛋白結(jié)合上熒光或放射性標(biāo)記,即為蛋白質(zhì)探針。
(2)上述HAT培養(yǎng)基是
(填“液體”或“固體”)培養(yǎng)基。融合成雜交瘤細(xì)胞后再檢測尋找產(chǎn)生特定目標(biāo)蛋白的雜交瘤細(xì)胞,而不直接在脾細(xì)胞中尋找產(chǎn)生特定蛋白的B淋巴細(xì)胞的原因是
。
Ⅱ、不對稱PCR是利用不等量的一對引物來產(chǎn)生大量單鏈DNA(ssDNA)的方法。該方法制備的ssDNA結(jié)合上熒光或放射性標(biāo)記,即為核酸探針。
(3)不對稱PCR中加入的一對引物中含量較少的被稱為限制性引物,含量較多的被稱為非限制性引物。兩者的比例通常為1:100。PCR反應(yīng)的最初的若干次循環(huán)中,其擴(kuò)增產(chǎn)物主要是雙鏈DNA(dsDNA),但當(dāng)限制性引物消耗完后,就會產(chǎn)生大量的ssDNA。據(jù)下圖可知,最后大量獲得的ssDNA是圖中的
(填“甲”或“乙”)鏈。
(4)若反應(yīng)最初有a個模板DNA分子,最初的6次循環(huán)擴(kuò)增產(chǎn)生dsDNA,后10個循環(huán)均只擴(kuò)增ssDNA,則需要限制性引物
個。請繪制這16個循環(huán)中ssDNA的分子數(shù)量隨循環(huán)次數(shù)的變化圖2。(說明:縱軸的刻度請自行標(biāo)注。)