10．2008年諾貝爾化學(xué)獎授予了三位在研究綠色熒光蛋白（GFP）方面做出突出貢獻(xiàn)的科學(xué)家．綠色熒光蛋白能在藍(lán)光或紫外光的激發(fā)下發(fā)出熒光，這樣借助GFP發(fā)出的熒光就可以跟蹤蛋白質(zhì)在細(xì)胞內(nèi)部的移動情況，幫助推斷蛋白質(zhì)的功能．圖1為我國首例綠色熒光蛋白（GFP）轉(zhuǎn)基因克隆豬的培育過程示意圖，據(jù)圖回答：
（1）綠色熒光蛋白（GFP）轉(zhuǎn)基因克隆豬的培育過程必須用到的生物技術(shù)有
（至少寫出三種）．
（2）圖中通過過程①、②形成重組質(zhì)粒，需要限制性核酸內(nèi)切酶切取目的基因、切割質(zhì)粒．限制性核酸內(nèi)切酶Ⅰ的識別序列和切點(diǎn)是-G
↓GATCC-，限制性核酸內(nèi)切酶Ⅱ的識別序列和切點(diǎn)是-
↓GATC-．在質(zhì)粒上有酶Ⅰ的一個(gè)切點(diǎn)，在目的基因的兩側(cè)各有1個(gè)酶Ⅱ的切點(diǎn)．
①請畫出質(zhì)粒被限制酶Ⅰ切割后所形成的黏性末端（圖2）．
②在DNA連接酶的作用下，上述兩種不同限制酶切割后形成的黏性末端能否連接？
；理由是：
．
（3）如果將切取的GFP基因與抑制小豬抗原表達(dá)的基因一起構(gòu)建到載體上，GFP基因可以作為基因表達(dá)載體上的標(biāo)記基因，其作用是
．獲得的轉(zhuǎn)基因克隆豬，可以解決的醫(yī)學(xué)難題是可以
．
（4）目前科學(xué)家們通過蛋白質(zhì)工程制造出了藍(lán)色熒光蛋白、黃色熒光蛋白等，采用蛋白質(zhì)工程技術(shù)制造出藍(lán)色熒光蛋白過程的正確順序（圖3）是：
（用數(shù)字表示）．
①推測藍(lán)色熒光蛋白的氨基酸序列和基因的核苷酸
②藍(lán)色熒光蛋白的功能分析和結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì)序列
③藍(lán)色熒光蛋白基因的修飾（合成）
④表達(dá)出藍(lán)色熒光蛋白．
（5）如果要將某目的基因通過農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法導(dǎo)入植物細(xì)胞，先要將目的基因插入農(nóng)桿菌Ti質(zhì)粒的
中，然后用該農(nóng)桿菌感染植物細(xì)胞，通過DNA重組將目的基因插入植物細(xì)胞的
上．
（6）假設(shè)以大腸桿菌質(zhì)粒作為運(yùn)載體，并以同一種限制性核酸內(nèi)切酶分別切割運(yùn)載體與目的基因，將切割后的運(yùn)載體與目的基因片段混合，并加入DNA連接酶．連接產(chǎn)物至少有
種環(huán)狀DNA分子，它們分別是
．
