23．宮頸癌主要由人乳頭瘤病毒（HPV）誘發(fā)，癌細胞轉(zhuǎn)移成為影響病人預(yù)后的重要因素?；虺聊夹g(shù)可通過阻斷特定基因的異常表達進行調(diào)控，發(fā)揮治療作用?？蒲腥藛T進行了“PIK3CA基因沉默抑制PI3K/AKT信號通路的激活，對宮頸癌EMT的影響”的探究。EMT在腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要作用。E-鈣黏蛋白、N-鈣黏蛋白和波形蛋白是EMT的重要標(biāo)志性因子。下表為相關(guān)探究步驟，請回答：
| 探究步驟 |
具體內(nèi)容 |
| 觀察分析、提出問題 |
前期研究發(fā)現(xiàn)PIK3CA基因與宮頸癌密切相關(guān)，PI3K/AKT信號通路的激活參與腫瘤的發(fā)生發(fā)展。抑制腫瘤EMT能提高治療效果和改善預(yù)后。由此提出問題：是否能抑制PI3K/AKT信號通路的激活進而抑制宮頸癌細胞發(fā)生轉(zhuǎn)移？ |
| 提出假說 |
通過基因沉默技術(shù)抑制PIK3CA基因表達，可使PI3K/AKT信號通路的激活被抑制，導(dǎo)致EMT有關(guān)的① 的表達受影響，從而防止癌細胞的轉(zhuǎn)移擴散。 |
| 演繹推理、作出預(yù)期 |
通過基因沉默技術(shù)可抑制PIK3CA基因表達，使PIK3CA、PI3K、AKT的表達量顯著降低，使得PI3K/AKT信號通路的激活受到抑制，進一步導(dǎo)致EMT有關(guān)的E-鈣黏蛋白、N-鈣黏蛋白和波形蛋白的表達受到影響，抑制宮頸癌細胞的轉(zhuǎn)移。 |
| ② |
設(shè)計以下六組實驗：a組（人宮頸癌細胞）、b組（人宮頸癌細胞+轉(zhuǎn)染空白載體質(zhì)粒）、c組（人宮頸癌細胞+轉(zhuǎn)染PIK3CA過量表達載體）、d組（人宮頸癌細胞+轉(zhuǎn)染PIK3CA抑制表達質(zhì)粒）、e組（人宮頸癌細胞+PI3K/AKT信號通路拮抗劑）以及f組（③ ），進行相關(guān)實驗。 |
| ④ |
測定PIK3CA、PI3K、AKT以及EMT標(biāo)志蛋白的表達量。 |
（1）請補充完成表格中的內(nèi)容。
（2）實驗中，選擇宮頸癌細胞系HeLa置于氣體環(huán)境為
的37℃恒溫箱中進行傳代培養(yǎng)，收集細胞懸液進行6組實驗。實驗設(shè)置b組的目的是
。
（3）實驗采用實時定量PCR（qRT-PCR）和蛋白質(zhì)印跡技術(shù)檢測轉(zhuǎn)染后各組細胞的特定基因表達情況，前者主要用來直接檢測基因的
水平，后者需要進行凝膠電泳并制備特定表達蛋白的一抗和酶標(biāo)二抗用以顯色，通過單克隆抗體制備二抗的過程中需要給受體動物多次注射
以刺激機體產(chǎn)生相應(yīng)的免疫細胞。
（4）實驗結(jié)果顯示d、e、f組宮頸癌細胞的轉(zhuǎn)移明顯受到抑制，細胞凋亡率明顯增加。如圖是利用蛋白質(zhì)印跡技術(shù)檢測到的特定蛋白的表達情況（灰度越深表達量越高）。
分析圖1實驗結(jié)果可知：沉默PIK3CA基因與
均能降低PIK3CA、PI3K、AKT的表達，且兩者效果具有
；分析圖2實驗結(jié)果可知E-鈣黏蛋白對宮頸癌細胞的轉(zhuǎn)移具有
作用。
