54.PHB2蛋白具有抑制細胞增殖的作用。為探究PHB2蛋白抑制人宮頸癌細胞增殖的原因,研究者從基因數(shù)據(jù)庫中獲取了該蛋白的基因編碼序列(簡稱phb2基因),大小為0.9kb(lkb=1000堿基對),利用乳腺生物反應(yīng)器來表達該蛋白?;卮鹣铝袉栴}:
(1)為獲取phb2基因,提取該動物肝臟組織的總RNA,再經(jīng)
過程得到cDNA,以該cDNA為模板進行PCR擴增phb2基因,PCR需要的條件是
。
(2)制備乳腺生物反應(yīng)器前,首先將獲得的Phb2基因與
等調(diào)控元作連接;通常需要在基因兩端引入產(chǎn)生不同黏性末端的限制酶切割位點序列再構(gòu)建出表達載體,這種方案的優(yōu)點是
;將構(gòu)建好的基因表達載體通過
技術(shù)注入到受精卵中,再將受精卵培養(yǎng)成早期胚胎移入受體獲得轉(zhuǎn)基因成功的動物。
(3)近來人們嘗試制備唾液腺生物反應(yīng)器來代替乳腺生物反應(yīng)器,與乳腺生物反應(yīng)器相比其優(yōu)點是
(至少兩點),結(jié)合乳腺生物反應(yīng)器的制備,簡單說明唾液腺生物反應(yīng)器制備過程
。