PHB2蛋白具有抑制細胞增殖的作用。為探究PHB2蛋白抑制人宮頸癌細胞增殖的原因,研究者從基因數據庫中獲取了該蛋白的基因編碼序列(簡稱phb2基因),大小為0.9kb(lkb=1000堿基對),利用乳腺生物反應器來表達該蛋白?;卮鹣铝袉栴}:
(1)為獲取phb2基因,提取該動物肝臟組織的總RNA,再經 逆轉錄逆轉錄過程得到cDNA,以該cDNA為模板進行PCR擴增phb2基因,PCR需要的條件是 (成對的)引物,模板、四中脫氧核苷酸(dNTP)、耐高溫的DNA聚合酶(TaqDNA聚合酶)、緩沖液(成對的)引物,模板、四中脫氧核苷酸(dNTP)、耐高溫的DNA聚合酶(TaqDNA聚合酶)、緩沖液。
(2)制備乳腺生物反應器前,首先將獲得的Phb2基因與 乳腺中特異表達的基因的啟動子乳腺中特異表達的基因的啟動子等調控元作連接;通常需要在基因兩端引入產生不同黏性末端的限制酶切割位點序列再構建出表達載體,這種方案的優(yōu)點是 防止目的基因和質粒自身環(huán)化;使目的基因和載體正確(定向)連接防止目的基因和質粒自身環(huán)化;使目的基因和載體正確(定向)連接;將構建好的基因表達載體通過 顯微注射顯微注射技術注入到受精卵中,再將受精卵培養(yǎng)成早期胚胎移入受體獲得轉基因成功的動物。
(3)近來人們嘗試制備唾液腺生物反應器來代替乳腺生物反應器,與乳腺生物反應器相比其優(yōu)點是 不受性別和(生長發(fā)育)時間限制不受性別和(生長發(fā)育)時間限制(至少兩點),結合乳腺生物反應器的制備,簡單說明唾液腺生物反應器制備過程 將phb2基因與唾液腺中特異表達的基因的啟動子連接,構建出基因的表達載體導入受體細胞(受精卵),培養(yǎng)成早期胚胎移入受體將phb2基因與唾液腺中特異表達的基因的啟動子連接,構建出基因的表達載體導入受體細胞(受精卵),培養(yǎng)成早期胚胎移入受體。
【考點】基因工程的操作過程綜合.
【答案】逆轉錄;(成對的)引物,模板、四中脫氧核苷酸(dNTP)、耐高溫的DNA聚合酶(TaqDNA聚合酶)、緩沖液;乳腺中特異表達的基因的啟動子;防止目的基因和質粒自身環(huán)化;使目的基因和載體正確(定向)連接;顯微注射;不受性別和(生長發(fā)育)時間限制;將phb2基因與唾液腺中特異表達的基因的啟動子連接,構建出基因的表達載體導入受體細胞(受精卵),培養(yǎng)成早期胚胎移入受體
【解答】
【點評】
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