35.B基因存在于水稻基因組中,其在體細(xì)胞和精子中正常表達(dá),在卵細(xì)胞中不轉(zhuǎn)錄。為研究B基因表達(dá)對(duì)卵細(xì)胞的影響,設(shè)計(jì)并完成了如圖實(shí)驗(yàn)來(lái)獲取能夠在卵細(xì)胞中表達(dá)B基因的轉(zhuǎn)基因植株。請(qǐng)回答下列問(wèn)題:
注:Luc基因表達(dá)的熒光素酶能催化熒光素產(chǎn)生熒光
(1)圖中所示的基因表達(dá)載體需含有啟動(dòng)子,它是
識(shí)別并結(jié)合的位點(diǎn)。
(2)可利用
中的RNA構(gòu)建cDNA文庫(kù),從中獲得B基因中編碼蛋白的序列。將該序列與Luc基因連接成融合基因(表達(dá)的蛋白質(zhì)能保留兩種蛋白質(zhì)各自的功能),然后構(gòu)建基因表達(dá)載體。與基因組文庫(kù)相比,cDNA文庫(kù)的基因數(shù)相對(duì)較少,原因是
。
(3)基因工程操作的核心步驟是
。
(4)要判斷T-DNA是否整合到水稻細(xì)胞染色體DNA上,可采用
的方法進(jìn)行檢測(cè)。
(5)可以通過(guò)檢測(cè)加入
后該植株卵細(xì)胞中是否發(fā)出熒光,鑒定和篩選出能表達(dá)B基因的轉(zhuǎn)基因植株。