24.基因工程在農牧業(yè)、食品業(yè)和醫(yī)藥等方面展示出廣闊應用前景
(1)構建小鼠乳腺生物反應器批量生產(chǎn)人胰島素,通過
獲得cDNA,再PCR后獲得人胰島素基因。在PCR過程中溫度先上升到90℃以上,后降低到50℃其目的分別是
、
。一條單鏈cDNA在PCR儀中進行n次循環(huán),需要消耗
個引物。構建的表達載體導入的受體細胞是
。
(2)若受體細胞是大腸桿菌,常用Ca
2+處理大腸桿菌,使其處于感受態(tài),有利于
。理論上用大腸桿菌作為“工程菌株”制備的胰島素缺乏生物活性,從細胞結構功能的角度分析,原因是
。
(3)人肺特異性x蛋白(LUNX)基因是某種肺癌診斷的標志物。為研究LUNX基因的增強子是否具有增強基因表達的功能,及其發(fā)揮作用的位置是位于啟動子的上游還是下游??蒲腥藛T利用PCR技術擴增了3種LUNX基因增強子片段(用E1~E3表示)分別定向連接到pGL3載體中熒光素酶報告基因(luc
+)、SV40啟動子的上游和下游,如圖1和圖2所示。通過相關技術檢測熒光素酶的活性,從而對增強子的功能進行判斷,luc
+的表達強度越強,熒光素酶的活性越高。
①以上LUNX基因增強子片段經(jīng)回收純化測序正確后,將雙酶切后的PCR產(chǎn)物分別定向連接到用
雙酶切和
雙酶切的pGL3載體中,構建LUNX基因增強子分別位于報告基因上游和下游的載體。
②利用相關技術對熒光素酶的活性進行檢測,結果如圖3,能得出結論
。