44.采礦污染和不當使用化肥導致重金屬鎘(Cd)在土壤中過量積累。利用植物修復技術將土壤中的Cd富集到植物體內(nèi),進行后續(xù)處理(例如,收集植物組織器官異地妥善儲存),可降低土壤中Cd的含量。為提高植物對Cd污染土壤的修復能力,研究者將酵母液泡Cd 轉運蛋白(YCF1)(其基因序列內(nèi)含有1個↓GATC一序列)基因導入受試楊樹,并檢測了相關指標?;卮鹣铝袉栴}:
(1)通過生物信息學分離得到的YCF1基因可通過PCR進行擴增,擴增過程中DNA聚合酶具有
的特點,某次PCR擴增產(chǎn)物電泳結果顯示:實驗組和對照組都沒有任何條帶,從引物角度分析可能的原因有
。
(2)利用圖中質粒和目的基因構建重組質粒,應選用
酶切割質粒,酶切后的載體和目的基因片段,通過
酶作用后獲得重組質粒。轉入了重組質粒的受體菌,在分別含有四環(huán)素和氨芐青霉素的培養(yǎng)基中的生長情況分別為
,從平板上長出的菌落中提取質粒利用Sau3AⅠ進行酶切,最多可以得到
種大小不同的DNA片段。
限制酶 |
BamHⅠ |
XmaⅠ |
BclⅠ |
SmaⅠ |
Sau3AⅠ |
識別序列及切割位點 |
-G↓GATCC- |
-C↓CCGGG- |
-T↓GATCA- |
-CCC↓GGG- |
-↓GATC- |
(3)進行前期研究時,將含有YCF1基因的
導入大腸桿菌。研究者進一步獲得了轉YCF1基因的雄性不育楊樹株系,采用不育株系作為實驗材料的目的是
。