45.請根據(jù)“血紅蛋白的提取和分離”實(shí)驗(yàn),回答下列問題:
(1)血紅蛋白因含有
(該物質(zhì)中含F(xiàn)e
2+)而呈紅色,這有利于對提取過程進(jìn)行監(jiān)測。
(2)在進(jìn)行樣品處理時首先要使用
對紅細(xì)胞進(jìn)行洗滌。在該過程中,若
會使白細(xì)胞一同沉淀,達(dá)不到分離的效果。
(3)將洗滌好的紅細(xì)胞倒入燒杯中,加入
使紅細(xì)胞破裂,釋放出血紅蛋白,再通過離心的方法將血紅蛋白從混合液中分離出來。
(4)將收集的血紅蛋白溶液放在透析袋中進(jìn)行透析,透析的原理是
。
(5)通過凝膠色譜法將樣品進(jìn)一步純化。裝填色譜柱時不能有氣泡存在,因?yàn)?
降低分離效果。
(6)最后經(jīng)SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳進(jìn)行純度鑒定。加入 SDS可以使蛋白質(zhì)在聚丙烯酰胺凝膠中的遷移率完全取決于
。
(7)本實(shí)驗(yàn)用的是交聯(lián)葡聚糖凝膠(Sephadex G-75),其中“75”表示
,即每克凝膠膨脹時吸收水分7.5g。