如圖所示為質(zhì)粒B和一個(gè)含目的基因的DNA片段示意圖。圖中Ap為氨芐青霉素抗性基因，lacZ為藍(lán)色顯色基因（能使含該基因的大腸桿菌菌落呈藍(lán)色）。圖中EcoRⅠ、PvuⅠ為兩種限制酶，括號(hào)內(nèi)的數(shù)字表示限制酶切割位點(diǎn)與復(fù)制原點(diǎn)的距離。請據(jù)圖分析并回答問題：

（1）外源基因在受體細(xì)胞中能啟動(dòng)表達(dá)的關(guān)鍵是載體上具有

RNA聚合酶

RNA聚合酶

識(shí)別和結(jié)合的部位。
（2）將用限制酶

PvuⅠ

PvuⅠ

切開的質(zhì)粒B溶液與目的基因溶液混合，加入DNA連接酶連接后，導(dǎo)入大腸桿菌。為了便于篩選，作為受體細(xì)胞的大腸桿菌自身

不含

不含

（含/不含）lacZ基因和

沒有

沒有

（有/沒有）氨芐青霉素抗性。導(dǎo)入后應(yīng)從

大腸桿菌菌落的顏色和是否抗氨芐青霉素

大腸桿菌菌落的顏色和是否抗氨芐青霉素

兩個(gè)角度對受體細(xì)胞進(jìn)行篩選。
（3）將獲得的重組質(zhì)粒用EcoRⅠ完全酶切并進(jìn)行電泳觀察，若出現(xiàn)長度為3.1kb和

3.6

3.6

kb的片段，則載體和目的基因反向連接。若出現(xiàn)長度為

1.1

1.1

kb 和

5.6

5.6

kb的片段，則載體和目的基因正向連接。（重組質(zhì)粒上目的基因的插入位點(diǎn)與EcoRⅠ的識(shí)別位點(diǎn)之間的堿基對忽略不計(jì)）