新冠病毒（RNA病毒）引起的疫情仍在一些國家和地區(qū)肆虐，科研工作者研制的新冠病毒核酸檢測試劑盒（RT-PCR熒光探針法）為新冠肺炎疫情防控提供了快速、簡便、精準(zhǔn)的核酸檢測方案。RT-PCR熒光探針法即實時熒光定量PCR技術(shù)，通過熒光標(biāo)記的特異性探針，對PCR產(chǎn)物進(jìn)行標(biāo)記跟蹤，對待測樣品通過檢測熒光信號的累積（以Ct值表示）來確定樣本中是否有病毒核酸。新冠病毒檢測的具體操作過程如圖所示，回答下列問題：
（1）若要得到正確的檢測結(jié)果，正確的操作步驟是

④①⑤②③

④①⑤②③

（用數(shù)字序 號表示）。
①從病人組織樣本中提取RNA；
②利用PCR擴(kuò)增DNA片段；
③分析PCR擴(kuò)增結(jié)果；
④采集病人組織樣本；
⑤反轉(zhuǎn)錄獲得cDNA。
（2）PCR反應(yīng)中的每次循環(huán)可分為變性、復(fù)性和

延伸

延伸

三步，其中變性的溫度是

90℃以上

90℃以上

，復(fù)性的目的是

讓兩種引物通過堿基互補(bǔ)配對與兩條單鏈DNA結(jié)合

讓兩種引物通過堿基互補(bǔ)配對與兩條單鏈DNA結(jié)合

；PCR反應(yīng)過程中子鏈的延伸方向是

5，→3，

5，→3，

。
（3）采集新冠肺炎疑似患者的咽部細(xì)胞樣本提取核酸進(jìn)行上述RT-PCR過程，每一個擴(kuò)增出來的DNA序列，都可與預(yù)先加入的一段熒光標(biāo)記探針結(jié)合，產(chǎn)生熒光信號，擴(kuò)增出來的目的基因越多，觀察到的Ct值就越

大

大

。
（4）新冠病毒疫苗有多種，其中我國科學(xué)家已研發(fā)出的腺病毒載體重組新冠病毒疫苗（重組疫苗）是一種基因工程疫苗，其基本制備步驟是：將新冠病毒的S基因連接到位于載體上的腺病毒基因組DNA中，重組載體經(jīng)擴(kuò)增后轉(zhuǎn)人特定動物細(xì)胞，進(jìn)而獲得重組腺病毒并制成疫苗。重組疫苗只需要注射一針即可完成接種。數(shù)周后，接種者體內(nèi)仍然能檢測到重組腺病毒DNA，但其DNA不會整合到人的基因組中。請由此推測只需要注射一針即可起到免疫保護(hù)作用的原因：

重組腺病毒DNA在人體細(xì)胞中可持續(xù)表達(dá)抗原，反復(fù)刺激機(jī)體的免疫系統(tǒng)

重組腺病毒DNA在人體細(xì)胞中可持續(xù)表達(dá)抗原，反復(fù)刺激機(jī)體的免疫系統(tǒng)

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