啤酒生產需經過制麥、糖化、發(fā)酵等主要環(huán)節(jié)。糖化主要是將麥芽中的淀粉等有機物水解為小分子的過程。主要工藝流程如圖1所示，請回答下列問題：

（1）大麥是啤酒發(fā)酵的重要碳源，針對制麥及糖化步驟，下列說法正確的有

②③

②③

（填序號）。
①大麥萌發(fā)時僅產生淀粉酶，幾乎不產生蛋白酶
②用赤霉素處理大麥，可誘導淀粉酶的合成
③酵母不能直接利用淀粉，需要淀粉酶等將淀粉轉化成酵母可利用的糖
④糖化采用的溫度越高，淀粉水解速度越快
（2）啤酒發(fā)酵時具有活力的酵母需達到一定的數(shù)量，故在菌種活化的過程中，需定時取樣，檢測酵母的生長狀況。若某次樣品經2次10倍稀釋后，經臺盼藍染色（體積不計），在25×16型血細胞計數(shù)板上計數(shù)

無

無

色細胞，5個中格中的細胞數(shù)為244個，該樣品中活酵母細胞的密度為

1.22×10⁹

1.22×10⁹

個細胞/mL。
（3）敲除釀酒酵母中的蛋白酶基因，減少發(fā)酵液中蛋白的水解，有助于增強啤酒泡沫的穩(wěn)定性，從而改善啤酒的品質。以下是某科研小組的實驗：
①已知編碼酵母蛋白酶A（PEP4）的基因序列如圖2為非模板鏈）：
編碼該酶的mRNA，起始端的三個密碼子依次為

AUG、UUC、AGC

AUG、UUC、AGC

，終止密碼子為

UGA

UGA

。
②Cas9蛋白可在人為設定的RNA序列（gRNA）引導下，在選定位點切斷相應的DNA鏈（如圖3，在DNA自我連接的修復過程中產生突變。DNA序列中含NGG的位點具有較高的編輯效率（N為任意堿基）。上述PEP4序列虛線框中有

5

5

處可作為Cas9的優(yōu)選剪切位點。Cas9的剪切位點在其NGG識別位點的

3'

3'

側。（填“5“”或“3'”）
③用酪蛋白固體培養(yǎng)基篩選突變體，野生型可以水解酪蛋白，在菌落周圍形成透明圈。需要篩選透明圈

小

小

的菌落，表明其蛋白酶活性

弱

弱

。