基因工程重組亞單位疫苗是預(yù)防新冠病毒感染和傳播的一種有效方案，其原理是把新冠病毒上負(fù)責(zé)“生產(chǎn)”S蛋白的那部分基因找到，構(gòu)建體外重組表達(dá)載體，導(dǎo)入到微生物體內(nèi)，“生產(chǎn)”出需要的S蛋白制成疫苗。下圖是在體外構(gòu)建病毒S蛋白重組表達(dá)載體的實(shí)驗(yàn)流程及相關(guān)限制酶的酶切位點(diǎn)?；卮鹣铝袉栴}：
| 限制酶 | BamHI | BclI | Sau3AI | HindIII |
| 識(shí)別序列及切割位點(diǎn) |
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（1）從患者肺部組織中分離并提取得到病毒RNA，通過
逆轉(zhuǎn)錄
逆轉(zhuǎn)錄
獲得S蛋白的cDNA，再通過 PCR
PCR
法對(duì)S蛋白的基因進(jìn)行擴(kuò)增，擴(kuò)增的一般步驟是 變性→復(fù)性→延伸
變性→復(fù)性→延伸
。（2）用圖1中的質(zhì)粒X和圖2中的S蛋白基因構(gòu)建重組質(zhì)粒，應(yīng)選用
BclⅠ和HindⅢ
BclⅠ和HindⅢ
兩種限制酶切割，切割后通過 DNA連接
DNA連接
酶作用獲得重組質(zhì)粒。（3）轉(zhuǎn)化前，用含
Ca2+（CaCl2）
Ca2+（CaCl2）
的溶液處理大腸桿菌，使其成為感受態(tài)細(xì)胞。轉(zhuǎn)化后，將大腸桿菌置于含 四環(huán)素
四環(huán)素
的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，方便篩選出含重組質(zhì)粒的大腸桿菌。為進(jìn)一步鑒定篩選出的大腸桿菌是否導(dǎo)入S蛋白基因，可用引物 甲、丙
甲、丙
進(jìn)行擴(kuò)增驗(yàn)證。【考點(diǎn)】基因工程的操作過程綜合．
【答案】逆轉(zhuǎn)錄；PCR；變性→復(fù)性→延伸；BclⅠ和HindⅢ；DNA連接；Ca2+（CaCl2）；四環(huán)素；甲、丙
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
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發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：1引用：2難度：0.7
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1．下列有關(guān)基因工程技術(shù)和蛋白質(zhì)工程技術(shù)敘述正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：6引用：1難度：0.7 -
2．下列有關(guān)基因工程的敘述，正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2024/12/31 5:0:5組卷：3引用：2難度：0.7 -
3．幾丁質(zhì)是許多真菌細(xì)胞壁的重要成分，幾丁質(zhì)酶可催化幾丁質(zhì)水解。通過基因工程將幾丁質(zhì)酶基因轉(zhuǎn)入植物體內(nèi)，可增強(qiáng)其抗真菌病的能力?；卮鹣铝袉栴}：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫(kù)中獲得?；蛭膸?kù)包括和。
（2）生物體細(xì)胞內(nèi)的DNA復(fù)制開始時(shí)，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因時(shí)，使反應(yīng)體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個(gè)解鏈過程的共同點(diǎn)是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個(gè)DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當(dāng)幾丁質(zhì)酶基因和質(zhì)粒載體連接時(shí)，DNA連接酶催化形成的化學(xué)鍵是。
（4）提取RNA時(shí)，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉(zhuǎn)基因植株（幾丁質(zhì)酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6
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