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基因工程重組亞單位疫苗是預(yù)防新冠病毒感染和傳播的一種有效方案，其原理是把新冠病毒上負(fù)責(zé)“生產(chǎn)”S蛋白的那部分基因找到，構(gòu)建體外重組表達(dá)載體，導(dǎo)入到微生物體內(nèi)，“生產(chǎn)”出需要的S蛋白制成疫苗。下圖是在體外構(gòu)建病毒S蛋白重組表達(dá)載體的實驗流程及相關(guān)限制酶的酶切位點?；卮鹣铝袉栴}：
限制酶 BamHI BclI Sau3AI HindIII
識別序列及切割位點 菁優(yōu)網(wǎng) 菁優(yōu)網(wǎng) 菁優(yōu)網(wǎng) 菁優(yōu)網(wǎng)
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（1）從患者肺部組織中分離并提取得到病毒RNA，通過
逆轉(zhuǎn)錄
逆轉(zhuǎn)錄
獲得S蛋白的cDNA，再通過
PCR
PCR
法對S蛋白的基因進(jìn)行擴(kuò)增，擴(kuò)增的一般步驟是
變性→復(fù)性→延伸
變性→復(fù)性→延伸
。
（2）用圖1中的質(zhì)粒X和圖2中的S蛋白基因構(gòu)建重組質(zhì)粒，應(yīng)選用
BclⅠ和HindⅢ
BclⅠ和HindⅢ
兩種限制酶切割，切割后通過
DNA連接
DNA連接
酶作用獲得重組質(zhì)粒。
（3）轉(zhuǎn)化前，用含
Ca2+（CaCl2）
Ca2+（CaCl2）
的溶液處理大腸桿菌，使其成為感受態(tài)細(xì)胞。轉(zhuǎn)化后，將大腸桿菌置于含
四環(huán)素
四環(huán)素
的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，方便篩選出含重組質(zhì)粒的大腸桿菌。為進(jìn)一步鑒定篩選出的大腸桿菌是否導(dǎo)入S蛋白基因，可用引物
甲、丙
甲、丙
進(jìn)行擴(kuò)增驗證。

【答案】逆轉(zhuǎn)錄；PCR；變性→復(fù)性→延伸；BclⅠ和HindⅢ；DNA連接；Ca2+（CaCl2）；四環(huán)素；甲、丙
【解答】
【點評】
聲明：本試題解析著作權(quán)屬菁優(yōu)網(wǎng)所有，未經(jīng)書面同意，不得復(fù)制發(fā)布。
發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：1引用：2難度：0.7
相似題

  • 1．某科研小組從土壤菌株A、B中分離到同源性為93%的Bt1抗蟲基因和Bt2抗蟲基因的編碼序列，并運(yùn)用交錯延伸PCR技術(shù)獲得了抗蟲性能強(qiáng)的重組B基因，轉(zhuǎn)入煙草獲得成功，過程如圖所示。下列選項正確的是（　?。?br />菁優(yōu)網(wǎng)
    注：①交錯延伸PCR：基因Bt1和Bt2均作為模板，所需引物相同，圖中僅示其中一條鏈的延伸情況。②啟動子Pr1a可在煙草葉肉細(xì)胞中特異性啟動基因的轉(zhuǎn)錄。③圖中生長素合成酶基因是通過成熟mRNA逆轉(zhuǎn)錄獲得的DNA片段，可使植物細(xì)胞合成生長素。

    發(fā)布：2024/11/16 21:0:1組卷：36引用：2難度：0.5

  • 2．基因工程在農(nóng)牧業(yè)、醫(yī)藥衛(wèi)生和食品工業(yè)等多方面的應(yīng)用發(fā)展迅速，如圖表示利用基因工程技術(shù)生產(chǎn)人血清白蛋白的兩條途徑。下列敘述錯誤的是（　　）
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    發(fā)布：2024/11/14 7:0:1組卷：62引用：7難度：0.7

  • 3．經(jīng)由食物攝取過量生物胺會引起頭痛、胃腸道不適和過敏等不良反應(yīng)，嚴(yán)重時甚至危及生命，因此必須對食品中生物胺的含量進(jìn)行減控。微生物來源的多銅氧化酶（MCO）能高效分解生物胺，基于基因工程規(guī)模化生產(chǎn)重組MCO在食品工業(yè)中具有廣泛用途。我國科研人員采用PCR技術(shù)獲得發(fā)酵乳桿菌的MCO基因，然后轉(zhuǎn)入大腸桿菌中實現(xiàn)了高效表達(dá)。
    （1）通過上述基因工程技術(shù)獲取目標(biāo)產(chǎn)物，涉及如下步驟，則合理的操作步驟排序是
     
    （填寫下列編號）。
    ①篩選和鑒定含目的基因的受體細(xì)胞
    ②選用合適的方法獲取目的基因
    ③借助發(fā)酵工程規(guī)?；a(chǎn)目標(biāo)蛋白
    ④目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞
    ⑤目的基因和運(yùn)載體重組構(gòu)建表達(dá)載體
    （2）在PCR過程中，引物的功能是
     
    。
    A．啟動DNA復(fù)制
    B．規(guī)定擴(kuò)增區(qū)間
    C．解旋DNA雙鏈
    D．充當(dāng)復(fù)制模板
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    （3）為獲得目的基因MCO（圖甲灰色表示的序列），正確設(shè)計的PCR引物應(yīng)為圖甲中的
     
    。
    （4）獲取目的基因后，需要和載體重組導(dǎo)入受體細(xì)胞。載體的化學(xué)本質(zhì)是
     
    （填DNA或RNA/DNA或RNA）。
    （5）在常規(guī)PCR的每一輪擴(kuò)增反應(yīng)中，溫度隨時間的變化順序是圖乙中的
     
    。
    （6）若目的基因MCO經(jīng)限制酶切開后呈圖丙中圖2所示的末端，那么載體質(zhì)粒pCLY15（圖丙中圖1）需用
     
    和
     
    切開，才能與MCO片段高效連接。
    （7）下列實驗操作中，能有效鑒別載體質(zhì)粒pCLY15空載還是“滿載”的是
     
    。
    A．從抗藥性克隆中提取質(zhì)粒DNA，用合適的限制酶切割
    B．在選擇培養(yǎng)基中添加X-gal試劑，以克隆的顏色進(jìn)行鑒別
    C．從抗藥性克隆中提取質(zhì)粒DNA，以此為模板進(jìn)行PCR檢測
    D．將Ap抗性克隆轉(zhuǎn)移至含Tc（四環(huán)素）的平板上，根據(jù)大腸桿菌生長與否加以鑒別

    發(fā)布：2024/11/14 4:30:2組卷：29引用：3難度：0.5
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