PCR已成為分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室里的一種常規(guī)技術(shù)，其原理是利用DNA的半保留復(fù)制，在試管中進(jìn)行DNA的人工復(fù)制（如圖）。該技術(shù)可在很短的時(shí)間內(nèi)，將DNA擴(kuò)增幾百萬(wàn)倍甚至幾十億倍，使實(shí)驗(yàn)所需要的遺傳物質(zhì)可從生物體外獲得。
（1）加熱至94℃可使DNA雙鏈打開(kāi)，這一步是打開(kāi) 氫氫鍵，這一過(guò)程稱(chēng)為 變性變性。
（2）當(dāng)溫度降低時(shí)，引物與模板的 3′3′端結(jié)合，在耐高溫的DNA聚合酶的作用下，引物沿模板延伸，最終合成兩個(gè)DNA分子，此過(guò)程中原料是 四種脫氧核苷酸四種脫氧核苷酸，遵循的原則是 堿基互補(bǔ)配對(duì)原則堿基互補(bǔ)配對(duì)原則。
（3）PCR技術(shù)的必要條件，除了模板、引物、原料、酶，至少還需要三個(gè)條件，即液體環(huán)境、適宜的 溫度溫度和 酸堿度/pH酸堿度/pH，前者由PCR儀自動(dòng)調(diào)控，后者則靠 緩沖液緩沖液來(lái)維持。
（4）在PCR反應(yīng)過(guò)程中，DNA的復(fù)制需要引物，其主要原因是 DNA聚合酶不能從頭開(kāi)始合成DNA，只能從引物的3′端延伸DNA鏈DNA聚合酶不能從頭開(kāi)始合成DNA，只能從引物的3′端延伸DNA鏈。
【考點(diǎn)】DNA片段的擴(kuò)增與電泳鑒定．
【答案】氫；變性；3′；四種脫氧核苷酸；堿基互補(bǔ)配對(duì)原則；溫度；酸堿度/pH；緩沖液；DNA聚合酶不能從頭開(kāi)始合成DNA，只能從引物的3′端延伸DNA鏈
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
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發(fā)布：2024/7/9 8:0:8組卷：2引用：3難度：0.5
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1．以下是有關(guān)分離與鑒別DNA的技術(shù)，其中說(shuō)法正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2024/12/15 16:30:6組卷：5引用：1難度：0.5 -
2．科研人員克隆了豬白細(xì)胞抗原基因（SLA-2基因），構(gòu)建了該基因的真核表達(dá)載體，進(jìn)行了豬腎上皮細(xì)胞表達(dá)研究。實(shí)驗(yàn)的主要流程如圖1，SLA-2基因長(zhǎng)度為1100bp,質(zhì)粒B的總長(zhǎng)度為4445bp,其限制酶切點(diǎn)后的數(shù)字表示距復(fù)制原點(diǎn)的距離。請(qǐng)回答：
（1）過(guò)程①中，PCR擴(kuò)增SLA-2的原理是限制酶 BclⅠ NotⅠ XbaⅠ San3AⅠ 識(shí)別序列及切割位點(diǎn) T↓GATCA GC↓GGCCGC T↓CTAGA ↓GATC ，下列4種引物中應(yīng)選擇的是。
a 5'-GCTCTAGAATGCGGGTCAGGGGCCCTCAAGCCATCCTC
b 5'-GTTGCGGCCGCTCACACTCTAGGATCCTTGGTAAGGGACAC
c 5'-GCGATCATGCGGGTCAGGGGCCCTCAAGCCATCCTC
d 5'-GTTTGATCACTCACACTCTAGGATCCTTGGTAAGGGACAC
（2）過(guò)程②將重組質(zhì)粒導(dǎo)入大腸桿菌的目的是，該過(guò)程需要用處理大腸桿菌，使其成為感受態(tài)細(xì)胞。然后將大腸桿菌涂布在含有（抗生素）的培養(yǎng)基上培養(yǎng)。
（3）若用Sau3AⅠ和XbaⅠ完全酶切質(zhì)粒C后電泳，請(qǐng)?jiān)诖痤}紙相應(yīng)位置畫(huà)出可能得到的電泳條帶。
（4）科研中常用呤霉素對(duì)真核細(xì)胞進(jìn)行篩選，一般選擇最低致死濃度的前一個(gè)濃度作為篩選濃度的原因是：既可以讓大部分沒(méi)有抗性的細(xì)胞死亡又不會(huì)讓。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖2，根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果最佳的嘌霉素篩選濃度為。
（5）過(guò)程⑦研究人員用小鼠抗SLA抗原肽單克隆抗體檢測(cè)腎上皮細(xì)胞生產(chǎn)的抗原肽，其原理是，單克隆抗體能檢測(cè)其是否具有正確的，從而是否具有生物活性。
發(fā)布：2024/12/15 6:30:1組卷：41引用：3難度：0.6 -
3．下列關(guān)于“DNA片段的擴(kuò)增及電泳鑒定”的實(shí)驗(yàn)，說(shuō)法錯(cuò)誤的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2024/12/15 6:30:1組卷：3引用：1難度：0.6
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