人乳鐵蛋白（hLF）廣泛分布于乳汁等外分泌液，初乳中含量較高，對(duì)細(xì)菌、真菌和病毒等都有抑制作用。研究人員開(kāi)展人乳鐵蛋白基因乳腺特異性表達(dá)載體構(gòu)建及轉(zhuǎn)染研究，主要流程如圖，圖中AseⅠ、NheⅠ、SalⅠ、BamHⅠ代表相關(guān)限制酶切點(diǎn)，neor為新霉素抗性基因，BLG基因?yàn)棣氯榍虻鞍谆?，GFP基因?yàn)榫G色熒光蛋白基因。請(qǐng)回答：

（1）過(guò)程①方法的基本原理是先以人乳腺細(xì)胞總RNA為模板通過(guò)逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA（互補(bǔ)DNA），再通過(guò)PCR技術(shù)擴(kuò)增相應(yīng)的DNA片段——hLF基因。但是過(guò)程①中，不能從人肌肉細(xì)胞中提取RNA用于RT-PCR，這是因?yàn)?

hLF基因在人肌肉細(xì)胞中不轉(zhuǎn)錄

hLF基因在人肌肉細(xì)胞中不轉(zhuǎn)錄

，在RT-PCR過(guò)程中，加入的引物需在

5'

5'

端添加識(shí)別序列的限制酶是

SalⅠ和BamHⅠ

SalⅠ和BamHⅠ

，以便于hLF基因插入pEB質(zhì)粒中。
（2）過(guò)程②中，hLF基因插入到BLG基因之后，利用后者的啟動(dòng)子的目的是

使人乳鐵蛋白基因在山羊的乳腺細(xì)胞中表達(dá)

使人乳鐵蛋白基因在山羊的乳腺細(xì)胞中表達(dá)

。
（3）將轉(zhuǎn)染后的山羊乳腺上皮細(xì)胞先置于含新霉素的培養(yǎng)液中培養(yǎng)，能夠存活的細(xì)胞應(yīng)該是導(dǎo)入了

pEB質(zhì)?；騪EBL質(zhì)粒

pEB質(zhì)粒或pEBL質(zhì)粒

的細(xì)胞，再利用熒光顯微鏡觀察山羊乳腺上皮細(xì)胞是否有

綠色熒光

綠色熒光

以篩選出轉(zhuǎn)染成功的細(xì)胞。
（4）科研過(guò)程中，可以用PCR技術(shù)檢測(cè)受體細(xì)胞中的染色體上DNA上是否

插入了hLF基因

插入了hLF基因

或檢測(cè)

hLF基因是否轉(zhuǎn)錄出mRNA

hLF基因是否轉(zhuǎn)錄出mRNA

?？梢杂?

抗原—抗體雜交

抗原—抗體雜交

技術(shù)，檢測(cè)hLF基因是否翻譯成人乳鐵蛋白。