[選修3：現(xiàn)代生物科技專題]
人的生物節(jié)律異常與高血壓、糖尿病和內(nèi)分泌異常等多種疾病有關(guān)。我國科學(xué)家利CPISPR/Cas9基因編輯技術(shù)成功敲除獼猴成纖維細胞中的生物節(jié)律核心基因BMAL1，并將其與去核的卵母細胞融合，發(fā)育形成的早期胚胎植入代孕雌猴，共獲得5只克隆猴，用于研究生物節(jié)律機制?；卮鹣铝袉栴}：
（1）CPISPR/Cas9基因編輯技術(shù)的基本原理是利用特定的sgRNA與靶向基因的單鏈進行堿基互補配對定位，并引導(dǎo)Cas9蛋白對靶向基因進行切割，從而將靶向基因進行定向敲除。可見，Cas9蛋白相當(dāng)于基因工程中的

限制性核酸內(nèi)切酶（限制酶）

限制性核酸內(nèi)切酶（限制酶）

。獼猴成纖維細胞中的生物節(jié)律核心基因BMAL1被CPISPR/Cas9技術(shù)切割后，還需用

DNA連接酶

DNA連接酶

處理，使切割后的基因BMAL1與外源DNA片段相連，實現(xiàn)對基因BMAL1的敲除，以破壞其功能。
（2）通常用

顯微注射

顯微注射

的方法將成纖維細胞與去核的卵母細胞構(gòu)建成重組細胞。重組細胞需要在發(fā)育培養(yǎng)液中培養(yǎng)，該培養(yǎng)液的營養(yǎng)成分比較復(fù)雜，除含有

無機鹽和有機鹽

無機鹽和有機鹽

以外，還需要添加維生素、激素、氨基酸、核苷酸等營養(yǎng)成分，以及動物血清等物質(zhì)。早期胚胎培養(yǎng)到

桑葚胚或囊胚

桑葚胚或囊胚

期就可以進行胚胎移植，分娩后的獼猴經(jīng)鑒別并確定是否為轉(zhuǎn)基因獼猴。
（3）成纖維細胞能培育成轉(zhuǎn)基因獼猴，說明

高度分化的動物細胞核仍然具有全能性

高度分化的動物細胞核仍然具有全能性

。科學(xué)家選擇轉(zhuǎn)基因獼猴，而不選擇小鼠等其他哺乳動物作為研究對象來研究生物節(jié)律機制，主要的原因是

獼猴與人類的親緣關(guān)系更近

獼猴與人類的親緣關(guān)系更近

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